VE Floresan Etiketleme Drosophila Kalp Yapıları
Summary
Burada larva ve yetişkin kalp tüplerin farklı unsurları floresan etiketlenmesi için temel bir protokol tanımlamak<em> Drosophila melanogaster</em>. Bu örnekler, floresan veya konfokal mikroskopi ile görüntüleme için çok uygundur. Bu teknik, güçlü bir model organizma kalplerin özellikleri ayrıntılı yapısal analiz izin verir.
Abstract
<em> Drosophila melanogaster</em> Dorsal damar, kalp, kasılma kardiyomiyositlerde, yetişkinlerde kalp duvarı, destekleyici alary kasları ve, ventral uzunlamasına kas hücrelerinin bir katman her tarafında hizalamak perikardiyal hücreleri tek bir tabaka oluşan tübüler bir yapıdır. Kasılma lifleri ev myofibrils ve homolog ekstraselüler matriks bileşenleri ile etkileşim sitoskeletal / submembranous protein kompleksleri, yoğun paketlenmiş demetleri de dahil olmak üzere kas hücre mimarisini bileşenlerinin korunmuş. Burada disseke larva ve yarı sağlam yetişkin kalbini fiksasyon ve özellikle miyokard elemanlarının floresan etiketleme için bir protokol tarif<em> Drosophila</em>. Özellikle larva kalplerinde sarkomerik F-aktin ve α-aktinin etiketleme göstermektedir. Ayrıca, vahşi tip yetişkin kalplerinde, yetişkin sinekler ifade ve α-aktinin ve pericardin, tip IV ekstraselüler matriks kollajen F-aktin ve α-aktinin miyozin-GFP etiketlenmesi. Özellikle dikkat taşıma en aza indirir ve kalp tüpleri ve ilgili dokuların bütünlüğünü korumak için fırsat optimize yarı sağlam yetişkin kalpleri için bir montaj stratejisi verilir. Bu hazırlıklar, floresan ve konfokal mikroskobu ile görüntüleme için uygundur. Genel olarak, bu yordamı dikkatli ve ayrıntılı bir analiz için güçlü bir genetik çözülebilir bir model sistem kalbin yapısal özellikleri sağlar.
Protocol
Discussion
Burada Drosophila melanogaster dorsal damar ve görüntüleme için floresan veya konfokal mikroskopi ile ilgili dokuların hazırlanması ve boyanması için yararlı bir protokol mevcut. Rafine edilmiş ve yaygın olarak larva ve yetişkin Drosophila kalp tüpleri in situ görüntüleme iyi bir çözüme izin verir etkin boyama laboratuarımızda istihdam adımların kısa ve öz bir açıklama sağlamalıdır . Diğerleri kısaltılmış biçim, 2, 3, 4 benzer yöntemler var. </p…
Acknowledgements
Yazarlar SI Bernstein (San Diego Eyalet Üniversitesi) Bu yazının hazırlanması ile ilgili eleştirel okuma ve yararlı önerileri için teşekkür ederim. Bu çalışma SI Bernstein, SDSU, R. Bodmer, BIMR NIH hibe programı tarafından desteklenen ve G. Batılı Devletler, Amerikan Kalp Derneği Ortaklık Vogler ve A. Cammarato bir post-doktora bursu.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | Reagent | Sigma-Aldrich® | E4378 | |
| Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure | Reagent | Polysciences Inc. | 50-00-0 | |
| Triton-X-100 | Reagent | Sigma-Aldrich® | 9002-93-1 | |
| Alexa Fluor® 594 phalloidin | Reagent | Invitrogen™ | A12381 | |
| Vectashield® Mounting Medium for Fluorescence with DAPI | Reagent | Vector Laboratories, Inc. | H-1200 | |
| Tungsten pins | Reagent | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Pin holder | Reagent | Fine Science Tools | 26018-17 |
References
- Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. Drosophila larval NMJ dissection. J Vis Exp. , (2009).
- Molina, M. R., Cripps, R. M. Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells. Mech Dev. 1, 51-59 (2001).
- Dulcis, D., Levine, R. B. Glutamatergic innervation of the heart initiates retrograde contractions in adult Drosophila melanogaster. J Neurosci. 2, 271-280 (2005).
- Zeitouni, B. Signalling pathways involved in adult heart formation revealed by gene expression profiling in Drosophila. PLoS Genet. 10, 1907-1921 (2007).
- Robertson, C. W. The metamorphosis of Drosophila melanogaster, including an accurately timed account of the principal morphological change. J. Morphol. 2, 351-399 (1936).
- Miller, A. . The internal anatomy and histology of the imago of Drosophila melanogaster. , (1950).
- Rizki, T. M. The circulatory system and associated cells and tissues. , (1978).
- Cammarato, A. Myosin transducer mutations differentially affect motor function, myofibril structure, and the performance of skeletal and cardiac muscles. Mol Biol Cell. 2, 553-562 (2008).
- Taghli-Lamallem, O. Dystrophin deficiency in Drosophila reduces lifespan and causes a dilated cardiomyopathy phenotype. Aging Cell. 2, 237-249 (2008).
- Kelso, R. J. a database documenting a GFP protein-trap insertion screen in Drosophila melanogaster. Nucleic Acids Res. 32, D418-D420 (2004).
- Dietzl, G. A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila. Nature. 7150, 151-156 (2007).
- Mery, A. The Drosophila muscle LIM protein, Mlp84B, is essential for cardiac function. J Exp Biol. 211, 15-23 (2008).
