の蛍光標識ショウジョウバエハートの構造
Summary
ここでは、幼虫および成体から心臓管の様々な要素の蛍光標識するための基本的なプロトコルを記述する<em>キイロショウジョウバエ</em>。これらの標本は、蛍光または共焦点顕微鏡を介して画像処理に適しています。この手法は、強力なモデル生物からの心の機能の詳細な構造解析を可能にします。
Abstract
市販<em>キイロショウジョウバエ</em>背脈管、または心臓は、収縮心筋細胞、心臓の壁の両側に沿って整列心膜細胞、支持翼の筋肉と、成人では、腹側縦筋細胞の層の単層で構成された管状構造である。収縮繊維の家は、筋原線維と細胞外マトリックスの相同成分と相互作用細胞骨格/亜膜性のタンパク質複合体、の密集バンドルを含む筋肉の細胞構築の成分を保存。ここでは、固定するためのプロトコルと解剖の幼虫やセミ無傷の大人の心の中から特定の心筋梗塞の要素の蛍光標識を記述する<em>ショウジョウバエ</em>。具体的には、幼虫の心の中にF -アクチンサルコメアのとα-アクチニンのラベルを示す。さらに、我々はミオシン- GFPは野生型の大人の心で、大人のハエを表現し、α-アクチニンとpericardin、IV型細胞外マトリックスのコラーゲンで、F -アクチンとα-アクチニンの標識行います。特に注意がハンドリングを最小限に抑え、心臓の管と関連した組織の整合性を維持するための機会を最適化する半無傷の大人の心の取り付け戦略に与えられます。これらの製剤は、蛍光と共焦点顕微鏡を介して画像処理に適しています。全体的に、この手順は、強力な遺伝的に扱いやすいモデル系から心臓の構造的な特性を慎重かつ詳細な分析が可能になります。
Protocol
Discussion
ここでは、 キイロショウジョウバエの背の容器と蛍光または共焦点顕微鏡を介してイメージングのための関連する組織を準備し、染色のための有用なプロトコルを提示。私達はによって洗練されたと一般的に幼虫と成体ショウジョウバエの心臓管の in situイメージングでよく解決を可能にする効果的な染色のために私たちの研究室で用いられる手順の簡潔なアカウ?…
Acknowledgements
著者は、この原稿の準備に関する重要な読書と有益な提案のためにSIバーンスタイン（サンディエゴ州立大学）を感謝。この作品は、SIバーンスタイン、SDSU、へとR. Bodmer、BIMRにNIHの補助金によって支えられて、とアメリカ心臓協会の西部米国アフィリエイトからG.フォーグラーへとA. Cammaratoにポストドクトラルフェローシップによる。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | Reagent | Sigma-Aldrich® | E4378 | |
| Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure | Reagent | Polysciences Inc. | 50-00-0 | |
| Triton-X-100 | Reagent | Sigma-Aldrich® | 9002-93-1 | |
| Alexa Fluor® 594 phalloidin | Reagent | Invitrogen™ | A12381 | |
| Vectashield® Mounting Medium for Fluorescence with DAPI | Reagent | Vector Laboratories, Inc. | H-1200 | |
| Tungsten pins | Reagent | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Pin holder | Reagent | Fine Science Tools | 26018-17 |
References
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