Denne video beskriver isolere kræft stamceller fra brystkræft cellelinjer. Vi dyrker disse kræftstamceller til at generere primære mammosfærer til vurdering af selvfornyelse og beregning af sfæredannende effektivitet, hvilket gør det muligt at sammenligne på tværs af forskellige såningstætheder.
Protocol
1. Generation af primære mammosfærer fra Human Breast Cancer Cell Lines BEMÆRK: Udfør følgende trin under en steril hætte. Forbered Mammosphere Media, der indeholder DMEM/F12 suppleret med 2 mM L-glutamin, 100 U/ml penicillin, 100 U/ml streptomycin. Forbered komplette medier umiddelbart før brug ved at tilføje 20 ng/ml rekombinant human epidermal vækstfaktor (EGF; Sigma), 10 ng/ml rekombinant human basic fibroblast vækstfaktor (bFGF; F&U-systemer) og 1x B27…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
DMEM/F12
Lonza
CC-3151
2 mM L-glutamine
Sigma Aldrich
G8540
100 U/ml Penicillin & Streptomycin
Sigma Aldrich
P4083
20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF)
Sigma Aldrich
E9644
20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF)