Generation af primære mammosfærer: En teknik til at bestemme cellestyrken
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Lombardo et al., Mammosphere Formation Assay fra Human Breast Cancer Tissues and Cell Lines. (2015).
Denne video beskriver isolere kræft stamceller fra brystkræft cellelinjer. Vi dyrker disse kræftstamceller til at generere primære mammosfærer til vurdering af selvfornyelse og beregning af sfæredannende effektivitet, hvilket gør det muligt at sammenligne på tværs af forskellige såningstætheder.
Protocol
1. Generation af primære mammosfærer fra Human Breast Cancer Cell Lines BEMÆRK: Udfør følgende trin under en steril hætte. Forbered Mammosphere Media, der indeholder DMEM/F12 suppleret med 2 mM L-glutamin, 100 U/ml penicillin, 100 U/ml streptomycin. Forbered komplette medier umiddelbart før brug ved at tilføje 20 ng/ml rekombinant human epidermal vækstfaktor (EGF; Sigma), 10 ng/ml rekombinant human basic fibroblast vækstfaktor (bFGF; F&U-systemer) og 1x B27…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 | Lonza | CC-3151 | |
| 2 mM L-glutamine | Sigma Aldrich | G8540 | |
| 100 U/ml Penicillin & Streptomycin | Sigma Aldrich | P4083 | |
| 20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF) | Sigma Aldrich | E9644 | |
| 20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) | R&D systems | 233-FB-025 | |
| 1x B27 supplement | Invitrogen | 17504-044 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Scientific | 12399902 | |
| 0.5% trypsin/0.2% EDTA | Sigma Aldrich | 59418C | |
| Fetal calf serum | First Link UK | 02-00-850 | |
| Trypan blue | Sigma Aldrich | 93595 | |
| Low attachment 6-well plates | Corning | CLS3814 |
Cite This Article
Generation of Primary Mammospheres: A Technique to Determine Cell Potency. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20211, doi: (2023).