Generación de mamosferas primarias: una técnica para determinar la potencia celular

Abstract

Fuente: Lombardo et. al., Ensayo de formación de mamosfera de tejidos y líneas celulares de cáncer de mama humano. J. Vis. (2015).

Este video describe aislar las células madre cancerosas de las líneas celulares de cáncer de mama. Cultivamos estas células madre cancerosas para generar mamosferas primarias para evaluar la auto-renovación y calcular la eficiencia de formación de esferas, permitiendo la comparación entre diferentes densidades de siembra.

Protocol

1. Generación de mamosferas primarias de líneas celulares de cáncer de mama humano NOTA: Realice los siguientes pasos bajo una capucha de cultivo estéril. Preparar medios de mamosfera que contengan DMEM/F12 complementados con 2 mM L-glutamina, 100 U/ml de penicilina, 100 U/ml de estreptomicina. Preparar medios completos inmediatamente antes de su uso añadiendo 20 ng/ml de factor de crecimiento epidérmico humano recombinante (EGF; Sigma), 10 ng/ml recombinante f…

Materials

DMEM/F12	Lonza	CC-3151
2 mM L-glutamine	Sigma Aldrich	G8540
100 U/ml Penicillin & Streptomycin	Sigma Aldrich	P4083
20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF)	Sigma Aldrich	E9644
20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF)	R&D systems	233-FB-025
1x B27 supplement	Invitrogen	17504-044
Phosphate buffered saline (PBS)	Thermo Scientific	12399902
0.5% trypsin/0.2% EDTA	Sigma Aldrich	59418C
Fetal calf serum	First Link UK	02-00-850
Trypan blue	Sigma Aldrich	93595
Low attachment 6-well plates	Corning	CLS3814