Generazione di mammosfere primarie: una tecnica per determinare la potenza cellulare
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Lombardo et al., Mammosphere Formation Assay from Human Breast Cancer Tissues and Cell Lines. J. Vis. Exp. (2015).
Questo video descrive l’isolamento delle cellule staminali tumorali dalle linee cellulari del cancro al seno. Coltimiamo queste cellule staminali tumorali per generare mammosfere primarie per valutare l’auto-rinnovamento e calcolare l’efficienza di formazione delle sfere, consentendo il confronto tra diverse densità di semina.
Protocol
1. Generazione di mammosfere primarie dalle linee cellulari del cancro al seno umano NOTA: Eseguire i seguenti passaggi sotto una cappa di coltura sterile. Preparare i supporti mammosfera contenenti DMEM/F12 integrati con 2 mM di L-glutammina, 100 U/ml di penicillina, 100 U/ml di streptomicina. Preparare il supporto completo immediatamente prima dell’uso aggiungendo 20 ng/ml di fattore di crescita epidermico umano ricombinante (FEG; Sigma), fattore di crescita dei fi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 | Lonza | CC-3151 | |
| 2 mM L-glutamine | Sigma Aldrich | G8540 | |
| 100 U/ml Penicillin & Streptomycin | Sigma Aldrich | P4083 | |
| 20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF) | Sigma Aldrich | E9644 | |
| 20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) | R&D systems | 233-FB-025 | |
| 1x B27 supplement | Invitrogen | 17504-044 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Scientific | 12399902 | |
| 0.5% trypsin/0.2% EDTA | Sigma Aldrich | 59418C | |
| Fetal calf serum | First Link UK | 02-00-850 | |
| Trypan blue | Sigma Aldrich | 93595 | |
| Low attachment 6-well plates | Corning | CLS3814 |
Cite This Article
Generation of Primary Mammospheres: A Technique to Determine Cell Potency. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20211, doi: (2023).