Generering av primära mammosfärer: En teknik för att bestämma cellpotens
Published: April 30, 2023
Abstract
Källa: Lombardo et. al., Mammosphere Formation Assay from Human Breast Cancer Tissues and Cell Lines. J. Vis. Exp. (2015).
Denna video beskriver isolerande cancerstamceller från bröstcancer cellinjer. Vi odlar dessa cancerstamceller för att generera primära mammosfärer för att bedöma självförnyelse och beräkna sfärbildande effektivitet, vilket möjliggör jämförelse över olika såddtätheter.
Protocol
1. Generation av primära mammosfärer från mänskliga bröstcancer cellinjer OBS: Utför följande steg under en steril odlingshuv. Förbered Mammosphere Media innehållande DMEM/F12 kompletterat med 2 mM L-glutamin, 100 U/ml penicillin, 100 U/ml streptomycin. Förbered hela mediet omedelbart före användning genom att tillsätta 20 ng/ml rekombinant human epidermal tillväxtfaktor (EGF; Sigma), 10 ng/ml rekombinant mänsklig grundläggande fibroblast tillväxtfak…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 | Lonza | CC-3151 | |
| 2 mM L-glutamine | Sigma Aldrich | G8540 | |
| 100 U/ml Penicillin & Streptomycin | Sigma Aldrich | P4083 | |
| 20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF) | Sigma Aldrich | E9644 | |
| 20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) | R&D systems | 233-FB-025 | |
| 1x B27 supplement | Invitrogen | 17504-044 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Scientific | 12399902 | |
| 0.5% trypsin/0.2% EDTA | Sigma Aldrich | 59418C | |
| Fetal calf serum | First Link UK | 02-00-850 | |
| Trypan blue | Sigma Aldrich | 93595 | |
| Low attachment 6-well plates | Corning | CLS3814 |
Cite This Article
Generation of Primary Mammospheres: A Technique to Determine Cell Potency. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20211, doi: (2023).