Denna video beskriver isolerande cancerstamceller från bröstcancer cellinjer. Vi odlar dessa cancerstamceller för att generera primära mammosfärer för att bedöma självförnyelse och beräkna sfärbildande effektivitet, vilket möjliggör jämförelse över olika såddtätheter.
Protocol
1. Generation av primära mammosfärer från mänskliga bröstcancer cellinjer OBS: Utför följande steg under en steril odlingshuv. Förbered Mammosphere Media innehållande DMEM/F12 kompletterat med 2 mM L-glutamin, 100 U/ml penicillin, 100 U/ml streptomycin. Förbered hela mediet omedelbart före användning genom att tillsätta 20 ng/ml rekombinant human epidermal tillväxtfaktor (EGF; Sigma), 10 ng/ml rekombinant mänsklig grundläggande fibroblast tillväxtfak…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
DMEM/F12
Lonza
CC-3151
2 mM L-glutamine
Sigma Aldrich
G8540
100 U/ml Penicillin & Streptomycin
Sigma Aldrich
P4083
20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF)
Sigma Aldrich
E9644
20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF)