고밀도의 인간 배아 줄기 세포 문화의 급속한 섬유 아세포 제거
Summary
전환 문화에 피더 – 무료 조건에 지속적인 노력에도 불구하고, 인간 배아 줄기 세포 (hESC)의 유도와 문화 마우스 배아 피더 (MEFs)와 공동 문화에 달려 남아 있습니다. 여기, 우리는 신속하게 이전 실험에 hESC 문화에서 피더를 제거 소설 방법을 보여줍니다.
Abstract
마우스 배아 섬유 아세포의 (MEFs)는 blastocyst 절연 1 일 이후 인간 배아 줄기 세포 (hESCs) 문화를 확립하는 데 사용되었습니다. 이 피더 시스템은 셀 확장하는 동안 자연스럽게 차별화를 겪고에서 hESCs을 유지합니다. 그러나이 공동 문화에있어서, 집중적 인 노동이 고도로 숙련 된 인력을 필요로하고, 수율 낮은 hESC의 순도 4. 많은 실험실 hESC 문화의 피더 세포의 수를 (즉, 매트릭스 코팅 요리 또는 기타 피더 세포 유형 5-8을 포함) 최소화하기 위해 시도했습니다. 이러한 수정 문화 시스템은 몇 가지 약속을 표시했지만, 미토 마이신 C-처리 마우스 embyronic의 섬유 아세포로 배양의 hESCs hESC 문화의 원치 않는 자연 차별화를 병신하기 위해에 대한 표준 방법을 supplanted 없습니다. 따라서, hESC 확장에 사용되는 피더 세포는 분화 실험을하는 동안 제거해야합니다. 여러 기술 hESC의 공동 정화에 사용할 수 있지만피더에서 lonies은 (FACS, 맥, 또는 약물 내성 벡터의 사용), 이러한 기술은 노동 집약적 인 비용 및 / 또는 hESC에 파괴됩니다. 이 프로젝트의 목적은 hESCs의 순수한 인구의 수확을 가능하게 정화하는 방법을 발명하는 것이 었습니다. 우리는 합류 hESC 문화에서, MEF 인구는 MEF 시트의 간단하고 빠른 흡인을 사용하여 제거 할 수 관찰했다. 이 제거 "측면 휴대 전화의 스티렌 배양 접시에 낮은 바인딩 친화력을 가지고 MEFs의 결합, 그리고 자신의 세대 동안 바깥쪽으로 섬유 아세포를 누르는 줄기 세포 콜로니의 능력 등 여러 가지 요인에 따라 달라집니다 틈새 ". hESC 그런 다음 pluripotency의 유지 보수를 보장하기 위해 MEF 제거 후 10 일 SSEA-4, Oct3 / 4, Tra 1-81 표현에 조사되었다. 또한, hESC의 식민지는 hESC 확장의 추가 레벨을 제공 MEF 제거 후 큰 형태로의 성장을 계속 할 수있었습니다.
Protocol
Discussion
이 논문에 제시된 방법은 인간 배아 세포 문화에서 섬유 아세포 피더 세포를 제거에 신속하고 적은 비용이 많이 드는 대안을 제공합니다. 섬유 아세포의 성공적인 제거 더 이상 줄기 세포 문화에 개발이 세포의 단단히 합류 monolayer의 존재에 따라 달라집니다. 7~10일 후, 성장 hESC의 식민지는 식민지 사이에 점점 더 조밀 한 섬유 아세포 monolayer를 생성, 바깥 방향으로 피더 섬유 아세포를 밀어 것입?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 재생 의료의 캘리포니아 연구소 (RN2 – 00921-1) 및 NIH 투자 국가 연구 상 (F32-HL104924)에서 새로운 교수 상 II가 추진하는 사업
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| DDR2 | Santa Cruz | 7555 | Fibroblast Marker |
| Dapi | Calbiochem | 268298 | Cell Nucleus Marker |
| SSEA-4 | Millipore | MAB4304 | Human ESC Marker |
| Oct 3/4 | Santa Cruz | 9081 | Human ESC Marker |
| Flk-1 | BD Pharma | 555307 | Early Differentiation Marker |
| Tra-1-81 | Acris | AM20377AF4-S | Human ESC Marker |
Table 1. Table of specific reagents used for immunostaining the hESC.
References
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