快速高密度的人类胚胎干细胞培养成纤维细胞去除
Summary
尽管转型期文化无饲养层条件下的不断努力，人类胚胎干细胞（胚胎干细胞）的推导和文化仍然在很大程度上依赖于文化与的小鼠胚胎馈线（MEF中）。在这里，我们展示了一种新的方法，快速去除饲养者从人类胚胎干细胞培养实验前。
Abstract
小鼠胚胎成纤维细胞（MEF中）被用来建立人胚胎干细胞（胚胎干细胞）培养后，囊胚隔离1。馈线系统维护人类胚胎干细胞进行自发分化过程中细胞的扩张。然而，这种合作培养法是劳动密集型的，需要训练有素的人员，和产量低的人类胚胎干细胞纯度4。许多实验室已尝试的数目最小化胚胎干细胞培养在饲养细胞（ 即将基质被覆菜肴或其他的饲养细胞类型5-8）。这些修改后的文化系统已经显示了一些希望，但还没有取代以减缓不必要的自发分化的人类胚胎干细胞培养与丝裂霉素C-处理的鼠标embyronic成纤维细胞培养的人类胚胎干细胞的标准方法。因此，饲养层细胞分化实验用于人类胚胎干细胞扩张的过程中被删除。虽然有几种技术可用于纯化的人类胚胎干细胞的共同从馈线lonies（FACS，MACS，或使用的药物产生抗药性向量），这些技术是劳动力密集型的，昂贵的和/或破坏性的人类胚胎干细胞。这个项目的目的是净化发明了一种方法，使一个的素净人口的人类胚胎干细胞的收获。我们观察到，在一个融合的人类胚胎干细胞培养，的MEF人口可以被删除，使用简单，快速的愿望的MEF表的。这种去除是依赖于几个因素，包括横向结合的细胞 – 细胞间的MEF，有一个较低的苯乙烯培养皿结合亲和力，和的能力的干细胞集落的成纤维细胞的生成期间的自己向外推“利基“。 SSEA-4，Oct3 / 4和茶1-81表达的人类胚胎干细胞，然后检查MEF切除后10天，以确保维持多能性。此外，人类胚胎干细胞菌落能够去除后，MEF将继续增长，到更大的排兵布阵，提供其他级别的人类胚胎干细胞扩张。
Protocol
Discussion
这个手稿中提出的方法，提供了一个快速和成本更低的替代，以消除从人类胚胎细胞培养的成纤维细胞饲养细胞。除去的成纤维细胞的成功依赖于存在的紧密，开发在较长的干细胞培养这些细胞的汇合单层。 7-10天之后，生长的胚胎干细胞的菌落将在向外的方向上推送纸器的成纤维细胞，生成之间菌落越来越致密的成纤维细胞单层。很强的细胞，细胞内的成纤维细胞单层的附件允许其迅速清除的?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由新教师奖由美国加州再生医学研究所（RN2-00921-1），和美国国立卫生研究院资助的国家研究奖（F32-HL104924）
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| DDR2 | Santa Cruz | 7555 | Fibroblast Marker |
| Dapi | Calbiochem | 268298 | Cell Nucleus Marker |
| SSEA-4 | Millipore | MAB4304 | Human ESC Marker |
| Oct 3/4 | Santa Cruz | 9081 | Human ESC Marker |
| Flk-1 | BD Pharma | 555307 | Early Differentiation Marker |
| Tra-1-81 | Acris | AM20377AF4-S | Human ESC Marker |
Table 1. Table of specific reagents used for immunostaining the hESC.
References
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