代谢标记和流式细胞仪测定细胞周期进程的动力学
Summary
在细胞周期各阶段的进展和动力学跟踪微妙的变化，可以实现通过碘化丙啶与BrdU和总DNA染色核酸代谢标记的组合使用。这种方法避免了化学循环细胞同步的需要，从而防止非特异性的DNA损伤，这反过来又影响细胞周期进程的介绍。
Abstract
通过细胞周期的各个阶段的启动和后续进展的精确控制细胞增殖至关重要。细胞周期分裂，生长和繁殖和细胞周期的关键组成部分的放松管制已在诱发癌变1,2事件有牵连的一个组成部分。分子药物抗癌疗法经常针对负责监管和协调细胞周期分裂3的生物学途径。虽然细胞周期动力学往往根据不同细胞类型，细胞之间的细胞周期的四个阶段的分布是一致而不是在一个特定的细胞株，由于一贯的有丝分裂和生长因子的表达。遗传毒性事件和其他细胞的压力可导致细胞周期进程的一个临时块，在逮捕或在一个特定的细胞周期阶段的暂时停止导致允许instigation适当的反应机制。
实验观察与参考其细胞周期的进展阶段的细胞群的行为的能力是在细胞生物学的重要进展。常见的程序，如丝分裂摆脱，差速离心法或流式细胞仪为基础的排序是用于分离细胞，细胞周期的特定阶段4-6。这些分馏，细胞周期，丰富的人口，然后试验性治疗。产量，纯度和分离组分的可行性，可以经常使用这些物理的分离方法受到损害。同时，分离的细胞群，并开始实验性治疗，使分馏细胞可以进步，从选定的细胞周期阶段之间的时间间隔，可以构成重大的挑战在这些实验的成功实施和解释。
ST其他方法的UDY细胞周期阶段包括化学品的使用同步细胞。治疗的细胞，每个细胞周期阶段的关键代谢过程中的化学抑制剂阻止细胞周期进展到下一阶段的有用。例如，核苷酸还原酶抑制剂羟基脲停止在G1 / S期交界处的细胞限制供应脱氧核苷酸，DNA的积木。其他著名的化学品包括用aphidicolin治疗，G1期阻滞聚合酶阿尔法抑制剂，与秋水仙碱和诺考达唑治疗，这两种干扰有丝分裂纺锤体的形成，以停止在M期细胞，最后，治疗与DNA链终止5-fluorodeoxyridine的启动S期阻滞7-9。这些化学品的处理是同步在某个特定阶段的一个细胞的整个人口的有效手段。去除与化学，细胞归队齐声细胞周期。测试代理以下释放的治疗从细胞周期的阻断化学，确保引起的药物反应是从一个统一的，细胞周期的特定阶段的人口。然而，由于许多化学同步器是已知的基因毒性化合物，戏弄除了参与各种反应途径（与测试代理的同步器），是具有挑战性的。
在这里，我们描述了通过他们从DNA复制阶段的进展，通过他们的女儿细胞的分裂和分离的积极骑自行车细胞亚群，代谢标记方法。再加上流式细胞仪定量测量细胞周期动力学进展，该协议使在没有任何机械或化学诱导细胞强调，通常与其他细胞周期同步方法10。在下面的章节中，我们将讨论的方法，以及一些在生物医学研究中的应用。
Protocol
Discussion
结合流式细胞仪BrdU掺入，我们有必要的工具来研究细胞周期动力学。运作作为胸苷类似物的BrdU的独特属性是允许单车细胞的DNA含量定量。是什么让一个按照循环细胞亚群，通过S期的DNA复制到G2期的增长，并最终以细胞分裂纳入到越来越多的女儿在合成阶段的细胞周期的DNA链的BrdU 。女儿BrdU阳性细胞可连续之后，直到在时间点的BrdU标签稀释细胞分裂的信号降低到背景水平的程度。
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The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢安迪·约翰逊在不列颠哥伦比亚大学的生物医学研究中心的协助FACS分析。巨蟹座在黄实验室的研究经费是由加拿大癌症协会研究所（经营赠款＃019250）和药学院，不列颠哥伦比亚大学医学院的研究再投资资金。 JMYW由加拿大研究主席迈克尔·史密斯基金会为卫生研究职业发展计划的支持。
Materials
| Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| bromodeoxyuridine | Becton Dickinson | 55089 | |
| propidium iodide | Sigma | 287075 | 1mg/ml stock |
| FITC anti-BrdU | Becton Dickinson | 347583 | |
| sodium tetraborate | Fisher | S80172 | 0.1M, pH 8.5 |
| FACS Caliber | Becton Dickinson |
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