本文及随附视频我们的协议,用于生成在小鼠小肠组织工程,使用类器官单位支架的方法。
组织工程化小肠(TESI)已经成功地被用于拯救Lewis大鼠大量小肠切除后,在40天内恢复到术前的权重。1在人类中,大量小肠切除会导致短肠综合征,功能性吸收不良国家赋予重大的发病率,死亡率和医疗费用,包括肠外营养的依赖,肝功能衰竭和肝硬化,需要multivisceral器官移植。本文中,我们描述和记录我们的协议在小鼠模型中创建组织工程小肠一个多细胞类器官单位支架的方法。类器官单位是多细胞聚集来自肠道粘膜与间充质元素,包含3之间的关系,保留了肠道干细胞小生境。在目前和未来的研究中,我们的技术过渡到的鼠标将允许利用转基因工具,可以在这个物种在TESI形成的过程进行调查。5免疫功能低下小鼠品系的可用性也将允许我们应用该技术对人体肠道组织和优化形成的人TESI作为小鼠异种移植前的过渡到人类。我们的方法,采用良好生产规范(GMP)试剂和材料已经被批准用于人类患者,因此提供了一个重要的方法,依赖于脱细胞动物组织的优势。这种方法的最终目标是将其翻译给人类作为再生医学的短肠综合征的治疗策略。
我们提出了一个协议,用于组织工程在小鼠小肠类器官单位支架的方法。最关键的步骤是类器官单位准备。必须小心,以充分清洗和机械处理的组织,但等于必须小心不overdigest,或overtriturate的类器官单位消化后进行(步骤1.11)。类器官单位如果做到这一点,可以减少到单细胞,这可能会丢失在步骤1.12的上清液,并不大可能生存产生组织工程小肠,作为肠干细胞小生境将不被保存在这的情况下。…
The authors have nothing to disclose.
特雷西C. Grikscheit,埃里克R.巴特尔,和弗雷德里克·G.萨拉所支持的加州再生医学研究所(CIRM),授权号码RN2-00946-1(TCG)和TG2-01168(再培训局,FGS)。艾里逊L.施佩尔是一个大学的外科医生学会爱惜学者。 Yashuhiro虎岛是由一家儿童医院洛杉矶萨班研究所的研究生涯发展奖。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
HBSS | Gibco | 114170-112 | |
Antibiotic-Antimycotic 100X | Invitrogen | 15240-062 | |
Dispase | Gibco | 17105-041 | |
Collagenase Type 1 | Worthington | LS004194 | |
DMEM High Glucose 1X | Gibco | 11995-065 | |
Heat inactivated FBS | Invitrogen | 16140-071 | |
Biofelt 100% PGA | Concordia Medical | FELT01-1005 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
Poly-L-lactic acid | Durect | B6002-1 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
Type I Collagen, rat tail | Sigma-Aldrich | C3867-1VL | For polymer preparation as in Ref. 4 |
Ketoprofen 100 mg/ml | Fort Dodge Animal Health | 71-KETOI-100-50 | |
LabDiet 5001 rodent chow | LabDiet | 5001 | |
Septra 200 mg / 40 mg per 5 ml, USP | Hi-Tech Pharmacal | 50383-824-16 | |
Isoflurane, USP | Phoenix Pharmaceuticals | 57319-507-06 |