Engenharia de Tecidos do Intestino num modelo murino
Summary
Este artigo eo vídeo que acompanha apresentar o nosso protocolo para gerar o tecido de intestino no mouse, utilizando uma abordagem de unidades-em-andaime organóide.
Abstract
O tecido de intestino delgado (TESI) tem sido usados com sucesso para resgatar ratos Lewis após a ressecção intestinal maciça pequeno, resultando em retorno aos pesos pré-operatórios dentro de 40 dias. 1 em humanos, a ressecção intestinal maciça pequeno pode resultar em síndrome do intestino curto, uma má absorção funcional Estado que confere significativa morbidade, mortalidade e custos de saúde, incluindo a dependência da nutrição parenteral, insuficiência hepática e cirrose, e da necessidade de transplante de órgãos multivisceral. 2 Neste trabalho, descrever e documentar o nosso protocolo para criar o tecido de intestino em um modelo de camundongo com um multicelular organóides abordagem unidades-em-andaime. Unidades organóides são agregados multicelulares derivadas do intestino que contêm elementos e mucosas mesenquimal, 3 a relação entre o que preserva o nicho de células-tronco intestinal. 4 Na investigação em curso e futuras, a transição da nossa técnica para orato irá permitir uma investigação dos processos envolvidos na formação TESI utilizando as ferramentas transgénicas disponíveis nesta espécie. 5 A disponibilidade de estirpes de ratos imunodeficientes também nos permite aplicar a técnica de tecido intestinal humano e optimizar a formação de TESI humano como um xenoenxerto mouse antes de sua transição para os seres humanos. Nosso método emprega boas práticas de fabricação (BPF) reagentes e materiais que já foram aprovadas para o uso em pacientes humanos, e, portanto, oferece uma vantagem significativa sobre as abordagens que dependem de tecidos animais descelularizados. O objetivo final deste método é a sua tradução para os seres humanos como uma estratégia de medicina regenerativa terapêutica para a síndrome do intestino curto.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nós apresentamos um protocolo para a produção de tecidos de engenharia intestino no rato usando um organóides abordagem unidades-em-andaime. Os passos mais críticos são os da preparação de unidades organóide. Cuidados devem ser tomados para limpar adequadamente e mecanicamente processar o tecido, mas o mesmo cuidado deve ser tomado para não overdigest ou overtriturate as unidades organóides após a digestão é realizada (passo 1.11). Se isto é feito, as unidades organóides pode ser reduzida a uma única c?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Tracy C. Grikscheit, Erik R. Barthel, e Frédéric G. Sala são suportados pelo Instituto de Medicina Regenerativa da Califórnia (CIRM), números de subsídios RN2-00946-1 (TCG) e TG2-01168 (ERB, FGS). Allison L. Speer é uma Sociedade de Cirurgiões Universidade Ethicon estudioso. Yashuhiro Torashima é financiado pelo Los Angeles de Crianças Hospital Saban Research Institute Fellowship Desenvolvimento de Carreira.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| HBSS | Gibco | 114170-112 | |
| Antibiotic-Antimycotic 100X | Invitrogen | 15240-062 | |
| Dispase | Gibco | 17105-041 | |
| Collagenase Type 1 | Worthington | LS004194 | |
| DMEM High Glucose 1X | Gibco | 11995-065 | |
| Heat inactivated FBS | Invitrogen | 16140-071 | |
| Biofelt 100% PGA | Concordia Medical | FELT01-1005 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Poly-L-lactic acid | Durect | B6002-1 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Type I Collagen, rat tail | Sigma-Aldrich | C3867-1VL | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Ketoprofen 100 mg/ml | Fort Dodge Animal Health | 71-KETOI-100-50 | |
| LabDiet 5001 rodent chow | LabDiet | 5001 | |
| Septra 200 mg / 40 mg per 5 ml, USP | Hi-Tech Pharmacal | 50383-824-16 | |
| Isoflurane, USP | Phoenix Pharmaceuticals | 57319-507-06 |
References
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