L'ingegneria dei tessuti del colon in un modello murino
Summary
Questo articolo e il video di accompagnamento presentare il nostro protocollo per la generazione di tessuto ingegnerizzato intestino nel topo, utilizzando un organoid unità-on-scaffold approccio.
Abstract
Dell'ingegneria tissutale piccolo intestino (TESI) è stato utilizzato con successo per salvare i ratti Lewis dopo massiccia resezione dell'intestino tenue, con conseguente ritorno al peso pre-operatorie entro 40 giorni. 1 negli esseri umani, massiccia resezione del piccolo intestino può causare sindrome da intestino corto, un malassorbimento funzionale stato che conferisce una significativa morbidità, mortalità e costi sanitari tra cui la dipendenza nutrizione parenterale, insufficienza epatica e cirrosi, e la necessità di trapianti di organi multiviscerale. 2 In questo lavoro si descrivono e documentano il nostro protocollo per la creazione di tessuti ingegnerizzati intestino in un modello murino con una unità multicellulare organoid-on-scaffold approccio. Unità Organoid sono aggregati multicellulari derivanti dall'intestino che contengono elementi sia delle mucose e mesenchimali, 3 il rapporto tra che conserva l'intestinale nicchia delle cellule staminali. 4 Nella ricerca in corso e future, la transizione della nostra tecnica nelladel mouse consentirà di indagine dei processi che intervengono durante la formazione TESI utilizzando gli strumenti disponibili transgeniche in questa specie. 5 La disponibilità di ceppi di topi immunocompromessi inoltre ci permette di applicare la tecnica di tessuto intestinale umano e ottimizzare la formazione di TESI umana come xenotrapianto del mouse prima della sua transizione verso gli esseri umani. Il nostro metodo utilizza le buone prassi di fabbricazione (GMP) reagenti e materiali che sono già stati approvati per l'uso in pazienti umani, e offre quindi un vantaggio significativo rispetto agli approcci che si basano su tessuti animali decellularizzato. L'obiettivo finale di questo metodo è la sua traduzione per gli esseri umani come una strategia di medicina rigenerativa terapeutico per la sindrome dell'intestino corto.
Protocol
Representative Results
Discussion
Vi presentiamo un protocollo per la produzione di tessuti ingegnerizzati intestino nel topo utilizzando un unità-on-scaffold approccio organoid. Le fasi più critiche sono quelle della preparazione organoid unità. Bisogna fare attenzione a pulire in modo adeguato e meccanicamente elaborare il tessuto, ma la stessa cura deve essere presa per non overdigest o overtriturate le unità organoid dopo la digestione viene eseguita (passo 1.11). Se questo è fatto, le unità organoid può essere ridotto a singole cellule, che …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Tracy C. Grikscheit, Erik R. Barthel, e Frédéric G. Sala sono supportati dal California Institute for Regenerative Medicine (CIRM), i numeri di concedere RN2-00946-1 (TCG) e TG2-01168 (ERB, FGS). Allison L. Speer è una Società di Chirurgia dell'Università Ethicon studioso. Yashuhiro Torashima è finanziato da un ospedale pediatrico Fellowship Los Angeles Saban Research Career Development Institute.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| HBSS | Gibco | 114170-112 | |
| Antibiotic-Antimycotic 100X | Invitrogen | 15240-062 | |
| Dispase | Gibco | 17105-041 | |
| Collagenase Type 1 | Worthington | LS004194 | |
| DMEM High Glucose 1X | Gibco | 11995-065 | |
| Heat inactivated FBS | Invitrogen | 16140-071 | |
| Biofelt 100% PGA | Concordia Medical | FELT01-1005 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Poly-L-lactic acid | Durect | B6002-1 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Type I Collagen, rat tail | Sigma-Aldrich | C3867-1VL | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Ketoprofen 100 mg/ml | Fort Dodge Animal Health | 71-KETOI-100-50 | |
| LabDiet 5001 rodent chow | LabDiet | 5001 | |
| Septra 200 mg / 40 mg per 5 ml, USP | Hi-Tech Pharmacal | 50383-824-16 | |
| Isoflurane, USP | Phoenix Pharmaceuticals | 57319-507-06 |
References
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