Ingeniería de tejidos del intestino en un modelo murino
Summary
Este artículo y el vídeo de acompañamiento presentar nuestro protocolo para la generación de tejido de ingeniería intestino en el ratón, utilizando un organoide unidades-on-andamio enfoque.
Abstract
De tejido de ingeniería intestino delgado (TESI) ha sido utilizado con éxito para rescatar a ratas Lewis después de la resección masiva del intestino delgado, resultando en retorno a pesos preoperatorios en 40 días. 1 En los seres humanos, resección masiva del intestino delgado puede resultar en el síndrome del intestino corto, una malabsorción funcional Estado que confiere una significativa morbilidad, mortalidad y costes sanitarios, incluyendo la dependencia de nutrición parenteral, la insuficiencia hepática y cirrosis, y la necesidad de un trasplante de órganos multivisceral. 2 En este trabajo se describen y documentan nuestro protocolo para la creación de tejido modificado intestino en un modelo de ratón con un organoide multicelular unidades-on-andamio enfoque. Unidades de organoides son agregados multicelulares derivados del intestino que contienen elementos tanto de la mucosa y mesenquimales, 3 la relación entre el que conserva el nicho de células madre intestinal. 4 En la investigación en curso y futuros, la transición de nuestra técnica en laratón permitirá la investigación de los procesos que intervienen durante la formación de TESI mediante la utilización de las herramientas transgénicas disponibles en esta especie. 5 La disponibilidad de las cepas de ratón inmunocomprometidos también nos permitirá aplicar la técnica de tejido intestinal humano y optimizar la formación de TESI humana como un de ratón con xenoinjerto antes de su transición a los seres humanos. Nuestro método utiliza buenas prácticas de fabricación (GMP) reactivos y materiales que ya han sido aprobados para su uso en pacientes humanos, y por lo tanto ofrece una ventaja significativa sobre los enfoques que se basan en los tejidos animales descelularizados. El objetivo final de este método es su traducción a los seres humanos como una estrategia de medicina regenerativa terapéutico para el síndrome de intestino corto.
Protocol
Representative Results
Discussion
Se presenta un protocolo para la producción de tejido de ingeniería en el intestino del ratón utilizando un organoide unidades-on-andamio enfoque. Los pasos más importantes son los de la preparación de unidades organoide. Se debe tener cuidado de limpiar adecuadamente y procesar mecánicamente el tejido, pero el mismo cuidado debe ser tomado para no overdigest o overtriturate las unidades de organoides después de la digestión se lleva a cabo (paso 1,11). Si se hace esto, las unidades de organoides se puede reduci…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Tracy C. Grikscheit, Erik R. Barthel, y Frédéric G. Sala son apoyados por el Instituto de Medicina Regenerativa de California (CIRM), números de concesión RN2-00946-1 (TCG) y TG2-01168 (ERB, FGS). Allison L. Speer es una Sociedad de Cirujanos de la Universidad de Ethicon erudito. Yashuhiro Torashima es financiado por un Hospital de Niños de Los Angeles Fellowship Saban Research Institute de Desarrollo Profesional.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| HBSS | Gibco | 114170-112 | |
| Antibiotic-Antimycotic 100X | Invitrogen | 15240-062 | |
| Dispase | Gibco | 17105-041 | |
| Collagenase Type 1 | Worthington | LS004194 | |
| DMEM High Glucose 1X | Gibco | 11995-065 | |
| Heat inactivated FBS | Invitrogen | 16140-071 | |
| Biofelt 100% PGA | Concordia Medical | FELT01-1005 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Poly-L-lactic acid | Durect | B6002-1 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Type I Collagen, rat tail | Sigma-Aldrich | C3867-1VL | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Ketoprofen 100 mg/ml | Fort Dodge Animal Health | 71-KETOI-100-50 | |
| LabDiet 5001 rodent chow | LabDiet | 5001 | |
| Septra 200 mg / 40 mg per 5 ml, USP | Hi-Tech Pharmacal | 50383-824-16 | |
| Isoflurane, USP | Phoenix Pharmaceuticals | 57319-507-06 |
References
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