Génie tissulaire de l'intestin dans un modèle murin
Summary
Cet article et la vidéo qui l'accompagne présenter notre protocole pour générer génie tissulaire intestin chez la souris, en utilisant un organoïde unités-sur-échafaudage approche.
Abstract
Génie tissulaire intestin grêle (TESI) a été utilisée avec succès pour sauver des rats Lewis après une résection intestinale massive de petite, ce qui entraîne en retour de poids préopératoire dans les 40 jours 1. Chez l'homme, massif résection de l'intestin grêle peuvent entraîner un syndrome du grêle court, une malabsorption fonctionnelle Etat qui confère une importante morbidité, la mortalité et les coûts des soins de santé, y compris la dépendance nutrition parentérale, l'insuffisance hépatique et de la cirrhose, et la nécessité d'une transplantation d'organe multiviscérale. 2 Dans cet article, nous décrivons et documenter notre protocole pour la création par génie tissulaire intestin dans un modèle de souris avec un organoïde unités-sur-échafaudage approche multicellulaire. Unités sont organoïdes agrégats multicellulaires dérivées de l'intestin qui contiennent des éléments à la fois des muqueuses et mésenchymateuses, 3 la relation entre ce qui préserve la niche tige intestinale cellule. 4 Dans la recherche en cours et à venir, la transition de notre technique dans lesouris permettra d'enquête sur les processus impliqués lors de la formation TESI en utilisant les outils disponibles transgéniques chez cette espèce. 5 La disponibilité de souches de souris immunodéprimées nous permettra également d'appliquer la technique de tissu intestinal humain et optimiser la formation de TESI humain comme un xénogreffe de souris avant sa transition vers les humains. Notre méthode utilise bonnes pratiques de fabrication (BPF) des réactifs et des matériaux qui ont déjà été approuvés pour une utilisation chez des patients humains, et offre donc un avantage significatif par rapport aux approches qui reposent sur des tissus animaux décellularisé. Le but ultime de cette méthode est sa traduction à l'homme comme une stratégie thérapeutique pour la médecine régénérative syndrome de l'intestin court.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nous présentons un protocole pour la production par génie tissulaire intestin chez la souris en utilisant un organoïde unités-sur-échafaudage approche. Les étapes les plus importantes sont celles de la préparation organoïde unités. Il faut prendre soin de bien nettoyer et traiter mécaniquement le tissu, mais le même soin doit être pris pour ne pas overdigest ou overtriturate les unités organoïdes après la digestion est effectuée (étape 1.11). Si cela est fait, les unités organoïdes peut être réduit …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Tracy C. Grikscheit, Erik R. Barthel, et Frédéric G. Sala sont pris en charge par le California Institute for Regenerative Medicine (CIRM), numéros de subvention RN2-00946-1 (TCG) et TG2-01168 (ERB, FGS). Allison L. Speer est une Société de l'Université chirurgiens savant Ethicon. Yashuhiro Torashima est financé par un Hôpital pour enfants de Los Angeles Saban Bourse de recherche Institut de développement de carrière.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| HBSS | Gibco | 114170-112 | |
| Antibiotic-Antimycotic 100X | Invitrogen | 15240-062 | |
| Dispase | Gibco | 17105-041 | |
| Collagenase Type 1 | Worthington | LS004194 | |
| DMEM High Glucose 1X | Gibco | 11995-065 | |
| Heat inactivated FBS | Invitrogen | 16140-071 | |
| Biofelt 100% PGA | Concordia Medical | FELT01-1005 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Poly-L-lactic acid | Durect | B6002-1 | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Type I Collagen, rat tail | Sigma-Aldrich | C3867-1VL | For polymer preparation as in Ref. 4 |
| Ketoprofen 100 mg/ml | Fort Dodge Animal Health | 71-KETOI-100-50 | |
| LabDiet 5001 rodent chow | LabDiet | 5001 | |
| Septra 200 mg / 40 mg per 5 ml, USP | Hi-Tech Pharmacal | 50383-824-16 | |
| Isoflurane, USP | Phoenix Pharmaceuticals | 57319-507-06 |
References
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