Croissance des bactéries magnétotactiques du genre Magnetospirillum: souches MSR-1, 1-AMB et MS-1

Résumé

Nous présentons une procédure pour la culture de plusieurs souches de Magnetospirillum dans deux différents types de milieux de culture. Magnetospirillum gryphiswaldense souche MSR-1 est cultivée en liquide et en gradient de concentration₂ O milieu semi solide alors que M. magneticum souche AMB-1 et M. magnetotacticum souche MS-1 sont cultivés en milieu liquide.

Résumé

Magnétostatiques bactéries sont Gram négatifs, mobiles, principalement aquatiques procaryotes omniprésents dans les habitats d’eau douce et marins. Ils sont caractérisés par leur capacité de magnétosomes biomineralize, qui sont magnétiques taille nanométrique cristaux de magnétite (Fe₃O₄) ou greigite (Fe₃S₄) entouré d’une membrane lipidique bi-couche, dans leur cytoplasme. Pour la plupart des bactéries magnétotactiques connus, magnétosomes sont assemblés dans les chaînes dans le cytoplasme, ce qui confère un moment magnétique permanent aux cellules et obligeant à aligner passivement avec les champs magnétiques externes. En raison de ces caractéristiques, les bactéries magnétotactiques ont un grand potentiel pour des applications commerciales et médicales. Cependant, la plupart des espèces sont microaérophiles et ont des exigences spécifiques de O₂ concentration, ce qui les rend plus difficiles à se développer régulièrement que beaucoup d’autres bactéries comme Escherichia coli. Nous présentons des protocoles détaillés pour la culture de trois des souches de bactéries magnétotactiques, tous appartenant au genre Magnetospirillumplus largement étudiés. Ces méthodes permettent un contrôle précis de la concentration de₂ O mis à la disposition de la bactérie, afin de s’assurer qu’ils poussent normalement et synthétisent les magnétosomes. Croissance des bactéries magnétotactiques pour poursuivre ses études à l’aide de ces procédures ne nécessite pas l’expérimentateur d’être un expert en microbiologie. Les méthodes générales présentées dans cet article peuvent aussi servir à isoler et à la culture des autres bactéries magnétotactiques, bien qu’il soit probable que composition chimique de la croissance médias devront être modifiées.

Introduction

Bactéries magnétotactiques (MTB) représentent un large éventail d’omniprésents dans les habitats aquatiques d’eau douce et¹gramnégatives procaryotes. Ces bactéries ont la capacité de produire les cristaux magnétiques en magnétite (Fe₃O₄) ou greigite Fe₃S₄, qui sont le plus souvent assemblés dans des chaînes à l’intérieur des cellules. Ce motif structural particulière est due à la présence de plusieurs protéines spécifiques agissant aussi bien dans le cytoplasme de la bactérie et sur la membrane lipidique qui entoure chaque cristal². Chaque cristal individuel et ses vésicules de....

Protocole

1. installation de la Station de₂ N

Remarque : Choisissez le diamètre intérieur du tuyau pour qu’il peut être relié au réservoir de gaz avec fuite minimale et que le cylindre d’une seringue de 1 mL en plastique s’adapte étroitement dans ce tube. Une illustration de la complète N₂ station de gazage est fournie à la Figure 1.

1. En toute sécurité installer un réservoir de gaz N₂ à proximité d’un banc sur lequel il y a suffisamment d’espace pour mettre en place la station₂ N (une longueur d’environ 50 cm).
2. Raccorder à la citerne un morceau de tuyau assez....

Résultats

Succès de la préparation des milieux de croissance peut être évaluée comme suit. À la fin du processus, des solutions claires (i.e., libre de tout précipité) doit être obtenu (Ceci vaut pour les milieux liquides et le milieu semi-solide dégradé O₂ ). Une photo montrant l’aspect attendu du milieu liquid MSR-1 avant l’inoculation peut être vu dans la Figure 2 a. Un milieu semi-solide succès O₂ gradient de concentration est signalé.......

Discussion

Les exigences de concentration de₂ O spécifiques de m. tuberculosis rendent non négligeable à cultiver en laboratoire. Une étape clé du protocole pour le milieu liquide est la suppression initiale de tous les O₂ du milieu afin de contrôler la concentration finale en ajoutant un volume précis d’O₂, juste avant l’inoculation. Il a été démontré que MSR-1 pousse dans des conditions aérobies presque complètement, cependant, le magnétisme des cellules est considérablement réduit. Les résultats .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
AMB-1	American Type Culture Collection (ATCC)	ATCC 700264
MS-1	ATCC	ATCC 31632  ;
MSR-1	Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ)	DSM 6361
Citrate ferrique	Sigma-Aldrich	F3388-250G
Supplément d’oligo-éléments	ATCC	MD-TMS
KH2PO4	EMD	PX1565-1
MgSO4.7 H2O	EMD	MX0070-1
HEPES	BioShop Canada Inc	HEP001.250
NaNO3	Sigma-Aldrich	S5506-250G
Extrait de levure	Fischer scientific	DF210929
Peptone	Fischer scientific	DF0436-17-5
Solution de L-lactate de potassium (60 %)	Sigma-Aldrich	60389-250ML-F
D-(-)-Acide quinique	Sigma-Aldrich	138622
FeCl3.6H2O	Fischer scientific	I88-100
Complément vitaminique	ATCC	MD-VS
Succinate de sodium hexahydraté	Fischer scientific	S413-500
L-tartrate de sodium dibasique dihydraté	Sigma-Aldrich	228729-100G
Acétate de sodium trihydraté	EMD	SX0255-1
Resazurin	Difco	0704-13
Acide ascorbique	Sigma-Aldrich	A4544-25G
K2HPO4	Caledon	6620-1-65
FeCl2 .4H2O	Sigma-Aldrich	44939-250G
Bicarbonate	de sodium EMD	SX0320-1
NaCl	Caledon	7560-1
NH4Cl	EMD	1011450500
CaCl2.2 H2O	EMD	1023820500
Agar A	Bio Basic Canada Inc	FB0010
L-cystine.HCl.H2O	Sigma-Aldrich	C7880-100G
Seringues de 1,0 mL	Fischer scientific	B309659
25G x 1 aiguilles	BD	305125
flacons de sérum de 125 mL	Wheaton	223748
joints en aluminium de 20 mm	Wheaton	224223-01
Sertisseuse E-Z de 20 mm	Wheaton	W225303
bouchons en caoutchouc butyle	Bellco Glass, Inc.	2048-11800
Tubes Hungate	Chemglass (VWR)	CLS-4208-01
Bouchon de septum, 13mm, Hungate	Bellco Glass, Inc.	2047-11600
Tubes de culture en verre	Corning (VWR)	9826-16X
BioReagent	Sigma-Aldrich	H1758-100ML	11.6 - 12 N

Acide chlorhydrique 36.5-38 %,