在芽殖酵母中的自我复制寿命测量
Summary
在这篇文章中，我们提出了一个用于测量酵母母细胞的复制寿命一般协议。
Abstract
老化是一种退化性的过程，特点是逐渐恶化的细胞成分和细胞器造成的死亡率。芽殖酵母<em>酿酒酵母</em>已被广泛用于研究生物学的老化，以及酵母长寿的几个因素已经证明，在多细胞真核生物中，包括蠕虫中保守，苍蝇和老鼠<sup> 1</sup>。由于缺乏容易量化的年龄相关的表型酵母中的老化，已经检测几乎完全通过测量细胞在不同语境中的寿命，具有两种不同的生活中常见的用法的跨度范式<sup> 2</sup>。按时间的寿命是指时间长度，母细胞可以生存在一个不分裂的，静止的状态，和建议，以作为在多细胞真核生物有丝分裂后细胞老化的典范。复制的寿命，相反，是指前，一位母亲细胞衰老所产生的子细胞的数目，被认为是提供了一个模式在分裂活跃的细胞老化。在这里，我们提出了一个测量的芽殖酵母中的母亲细胞中的复制寿命的广义协议。复制寿命试验的目的是确定每个母细胞芽多次。母亲和女儿的细胞可以很容易地使用一个标准的光镜下（总放大倍率160X），如蔡司Axioscope 40或其他类似的模式，由经验丰富的研究员有区别的。配备一个光纤针使用手册显微子细胞从母细胞的物理分离。典型的实验室酵母菌株的产生20-30％的母亲的女儿细胞和寿命实验需要2-3周。
Protocol
第1部分：准备株的复制寿命分析和板本节介绍的复制寿命试验和酵母细胞寿命分析的准备使用固体YEPD板的准备。 使用适当的消毒技术，，准备将用于培养酵母细胞和复制寿命分析的YEPD培养基琼脂平板（1％酵母提取物，细菌用2％的蛋白胨，2％琼脂，2％葡萄糖）。你应该准备至少2板寿命实验分析，每4-5株。板应准备至少2天前寿命试验，寿命试验开始前，允许干。如果实验内不会4-5?…
Acknowledgements
这项工作是从埃利森医学基金会授予MK和曼谷的支持。 Mk为中老年埃利森医学基金会新学者。我们想感谢拍摄期间Soumya Kotireddy援助。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Bacto-Peptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) | |
| Glucose |
Riferimenti
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Tags
Replicative Life SpanBudding YeastAgingCellular ComponentsOrganellesMortalitySaccharomyces CerevisiaeBiology Of AgingAge-associated PhenotypesLife Span ParadigmsChronological Life SpanQuiescence-like StatePost-mitotic CellsReplicative Life Span AssayDaughter CellsSenescenceMitotically Active CellsLight Microscope
Citazione di questo articolo
Steffen, K. K., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast. J. Vis. Exp. (28), e1209, doi:10.3791/1209 (2009).