מדידת תוחלת החיים בשמרים replicative הנצה
Summary
במאמר זה אנו מציגים את פרוטוקול כללי למדידת חיים replicative טווח של תאים אמא שמרים.
Abstract
הזדקנות היא תהליך ניוונית המאופיינת הידרדרות מתקדמת של רכיבים סלולריים האברונים וכתוצאה מכך התמותה. שמרים ניצני<em> Saccharomyces cerevisiae</em> כבר בשימוש נרחב כדי לחקור את הביולוגיה של ההזדקנות, אריכות ימים הקובעים כמה שמרים הוכחו להשתמר אאוקריוטים תאיים, כולל תולעים, זבובים ועכברים<sup> 1</sup>. בשל העדר גיל הקשורים פנוטיפים לכמת בקלות, הזדקנות בשמרים כבר assayed באופן כמעט בלעדי על ידי מדידת אורך החיים של תאים בהקשרים שונים, עם שתי פרדיגמות שונות תוחלת החיים השימוש הנפוץ<sup> 2</sup>. תוחלת החיים כרונולוגית מתייחס למשך הזמן כי תא האם יכול לשרוד במצב הלא חלוקת קפאון דמוי, והוא הציע לשמש מודל עבור הזדקנות שלאחר mitotic תאים אאוקריוטים רב תאיים. תוחלת החיים replicative, לעומת זאת, מתייחס את מספר התאים בת המיוצר על ידי תא האם לפני הזדקנות, והוא נחשב לספק מודל של הזדקנות תאים פעילים mitotically. כאן אנו מציגים פרוטוקול כללית למדידת replicative תוחלת החיים של תאים אמא נבגי שמרים. המטרה של assay תוחלת החיים replicative הוא לקבוע כמה פעמים כל תא ניצנים אמא. התאים אמא ובת יכול להיות מובחן בקלות על ידי חוקר מנוסה באמצעות מיקרוסקופ אור רגיל (הכולל הגדלה 160X), כגון Axioscope Zeiss 40 או דגם אחר להשוואה. הפרדה פיזית של תאים מתאי הבת אמא מושגת באמצעות micromanipulator ידני מצויד במחט סיבים אופטיים. זני שמרים אופייני במעבדה לייצר תאים בת 20-30 לכל אמא אחת תוחלת החיים הניסוי דורש 2-3 שבועות.
Protocol
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי מענק לח"כ ו BKK מהמרכז הרפואי אליסון קרן. ח"כ הוא רפואי אליסון קרן מלומד חדש הזדקנות. ברצוננו להודות Soumya Kotireddy לסיוע במהלך הצילומים.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Bacto-Peptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) | |
| Glucose |
Riferimenti
- Kaeberlein, M., Burtner, C. R., Kennedy, B. K. Recent developments in yeast aging. PLoS Genet. 3, (2007).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109-120 (2006).
- Smith, E. D. Quantitative evidence for conserved longevity pathways between divergent eukaryotic species. Genome Res. 18, 564-570 (2008).
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29-54 (2008).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63, 113-121 (2008).
- Jiang, J. C., Jaruga, E., Repnevskaya, M. V., Jazwinski, S. M. An intervention resembling caloric restriction prolongs life span and retards aging in yeast. Faseb J. 14, 2135-2137 (2000).
- Kaeberlein, M., Kirkland, K. T., Fields, S., Kennedy, B. K. Sir2-independent life span extension by calorie restriction in yeast. PLoS Biol. 2, E296-E296 (2004).
- Lin, S. J., Defossez, P. A., Guarente, L. Requirement of NAD and SIR2 for life-span extension by calorie restriction in Saccharomyces cerevisiae. Science. 289, 2126-2128 (2000).
- Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Large-scale identification in yeast of conserved ageing genes. Mech Ageing Dev. 126, 17-21 (2005).
- Kaeberlein, M. Regulation of yeast replicative life span by TOR and Sch9 in response to nutrients. Science. 310, 1193-1196 (2005).
