Диапазона измерений репликативной Жизнь в почкующихся дрожжей
Summary
В этой статье мы представляем общий протокол для измерения диапазона репликативной жизни клеток дрожжей матери.
Abstract
Старение является дегенеративный процесс характеризуется прогрессирующей деградации клеточных компонентов и органелл в результате чего смертность. Почкующихся дрожжей<em> Saccharomyces CEREVISIAE</em> Широко используется для изучения биологии старения, а также нескольких определяющих факторов долголетия дрожжей было показано, что сохраняться в многоклеточных эукариот, в том числе червей, мух и мышей<sup> 1</sup>. Из-за отсутствия легко количественно возрасте связанных фенотипов, старения у дрожжей был почти исключительно анализировали путем измерения продолжительности жизни клеток в различных контекстах, с двумя различными жизни парадигм в обиходе<sup> 2</sup>. Хронологический продолжительность жизни относится к времени, что материнской клетки могут выживать в не-деления, покоя-подобного состояния, и ее предлагается в качестве модели для старения после делящихся клеток в многоклеточных эукариот. Промежуток репликативной жизни, напротив, относится число дочерних клеток производства материнской клетки до старости, и, как полагают, обеспечивают модели старения в митотически активных клеток. Здесь мы представляем обобщенные протокол для измерения диапазона репликативной жизни начинающего материнских клетках дрожжей. Цель анализа промежуток жизни репликативной заключается в определении того, сколько раз каждый почки материнской клетки. Мать и дочь клетки могут быть легко дифференцированы по опытный исследователь использованием стандартной световой микроскоп (общее увеличение 160X), таких как Axioscope Zeiss 40 или другой сопоставимой модели. Физическое разделение дочерних клеток от матери клетки достигается с помощью ручной микроманипулятора оснащен волоконно-оптической иглы. Типичные штаммы дрожжей лаборатории производят 20-30 дочерних клеток на одну женщину и одного продолжительность жизни эксперимент требует 2-3 недель.
Protocol
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантом МК и Бангкок из Эллисон Медицинский фонд. МК Эллисон Медицинский фонд Новый ученый в процессе старения. Мы хотели бы поблагодарить Soumya Kotireddy за помощь во время съемок.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Bacto-Peptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) | |
| Glucose |
Riferimenti
- Kaeberlein, M., Burtner, C. R., Kennedy, B. K. Recent developments in yeast aging. PLoS Genet. 3, (2007).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109-120 (2006).
- Smith, E. D. Quantitative evidence for conserved longevity pathways between divergent eukaryotic species. Genome Res. 18, 564-570 (2008).
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29-54 (2008).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63, 113-121 (2008).
- Jiang, J. C., Jaruga, E., Repnevskaya, M. V., Jazwinski, S. M. An intervention resembling caloric restriction prolongs life span and retards aging in yeast. Faseb J. 14, 2135-2137 (2000).
- Kaeberlein, M., Kirkland, K. T., Fields, S., Kennedy, B. K. Sir2-independent life span extension by calorie restriction in yeast. PLoS Biol. 2, E296-E296 (2004).
- Lin, S. J., Defossez, P. A., Guarente, L. Requirement of NAD and SIR2 for life-span extension by calorie restriction in Saccharomyces cerevisiae. Science. 289, 2126-2128 (2000).
- Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Large-scale identification in yeast of conserved ageing genes. Mech Ageing Dev. 126, 17-21 (2005).
- Kaeberlein, M. Regulation of yeast replicative life span by TOR and Sch9 in response to nutrients. Science. 310, 1193-1196 (2005).
