Medição Span vida replicativa na levedura de brotamento
Summary
Neste artigo apresentamos um protocolo geral para medir o tempo de vida replicativa das células-mãe do fermento.
Abstract
O envelhecimento é um processo degenerativo caracterizado por uma deterioração progressiva de componentes celulares e organelas, resultando em mortalidade. A levedura de brotamento<em> Saccharomyces cerevisiae</em> Tem sido amplamente utilizado para estudar a biologia do envelhecimento, e diversos determinantes da longevidade de leveduras foram mostrados para ser conservada em eucariotos multicelulares, incluindo vermes, moscas e ratos<sup> 1</sup>. Devido à falta de facilmente quantificado associado à idade fenótipos, o envelhecimento em leveduras foi ensaiada quase exclusivamente através da medição do tempo de vida das células em diferentes contextos, com dois paradigmas de vida diferentes extensão de uso comum<sup> 2</sup>. Esperança de vida cronológica refere-se ao período de tempo que uma célula mãe pode sobreviver em uma não-divisão, o estado de quiescência-like, e se propõe a servir de modelo para o envelhecimento de células pós-mitóticas em eucariontes multicelulares. Tempo de vida replicativa, em contrapartida, refere-se o número de células filhas produzidas por uma célula-mãe antes de senescência, e é pensado para proporcionar um modelo de envelhecimento nas células mitoticamente ativo. Aqui apresentamos um protocolo generalizada para medir o tempo de vida replicativa das células-mãe de brotamento de leveduras. O objetivo do ensaio período replicativo vida é determinar quantas vezes cada buds célula-mãe. As células mãe e filha podem ser facilmente diferenciadas por um pesquisador experiente, usando um microscópio de luz standard (ampliação total 160X), como o Axioscope Zeiss 40 ou outro modelo comparável. Separação física das células-filhas a partir de células mãe é conseguido usando um micromanipulador manuais equipada com uma agulha de fibra óptica. Cepas de leveduras típicas de laboratório 20-30 produzir células-filhas por mãe e um experimento de tempo de vida exige de 2-3 semanas.
Protocol
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado por uma doação para MK e BKK da Medical Foundation Ellison. MK é um Ellison Medical Foundation Scholar novo no Envelhecimento. Gostaríamos de agradecer Soumya Kotireddy para a assistência durante as filmagens.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Bacto-Peptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) | |
| Glucose |
Riferimenti
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