Mess-replikative Lebensspanne in der Hefe
Summary
In diesem Artikel präsentieren wir ein allgemeines Protokoll zur Messung der replikativen Lebensspanne von Hefe Mutter-Zellen.
Abstract
Altern ist ein degenerativer Prozess durch eine progressive Verschlechterung der zellulären Bestandteile und Organellen aufgrund der Mortalität gekennzeichnet. Die Bierhefe<em> Saccharomyces cerevisiae</em> Wurde ausgiebig auf die Biologie des Alterns Studie verwendet, und mehrere Determinanten der Hefe Langlebigkeit haben gezeigt, dass in vielzelligen Eukaryoten, einschließlich Würmern konserviert werden, Fliegen und Mäusen<sup> 1</sup>. Aufgrund des Fehlens von leicht quantifizieren Alter-assoziierten Phänotypen, Altern in Hefe wurde fast ausschließlich durch die Messung der Lebensdauer von Zellen in unterschiedlichen Kontexten untersucht, mit zwei unterschiedlichen Lebensdauer Paradigmen im allgemeinen Sprachgebrauch<sup> 2</sup>. Chronologische Lebensdauer bezieht sich auf die Länge der Zeit, dass eine Mutter Zelle kann in einem nicht-teilenden, Ruhe-ähnlichen Zustand zu überleben, wird vorgeschlagen, die als Modell für die Alterung der post-mitotischen Zellen in vielzelligen Eukaryoten dienen. Replikativen Lebensspanne, im Gegensatz dazu bezieht sich die Zahl der Tochterzellen von einer Mutterzelle vor Seneszenz produziert, und es wird vermutet, um ein Modell des Alterns in mitotisch aktiven Zellen. Hier präsentieren wir eine verallgemeinerte Protokoll zur Messung der replikativen Lebensspanne von Hefezellen Mutter-Zellen. Das Ziel der replikativen Lebensspanne Test ist zu bestimmen, wie oft jede Mutterzelle Knospen. Die Mutter und Tochter-Zellen können leicht von einem erfahrenen Wissenschaftler mit einem Standard-Lichtmikroskop (Gesamtvergrößerung 160X), wie die Zeiss Axioskop 40 oder ein anderes vergleichbares Modell unterschieden werden. Die physische Trennung der Tochterzellen von der Mutter-Zellen wird durch eine manuelle Mikromanipulator mit einem Glasfaser-Nadel ausgestattet. Typische Labor Hefestämme produzieren 20-30 Tochterzellen pro Mutter und eine Lebensdauer Experiment erfordert 2-3 Wochen.
Protocol
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch einen Zuschuss zu MK und BKK von der Ellison Medical Foundation unterstützt. MK ist eine Ellison Medical Foundation New Scholar in Aging. Wir möchten Soumya Kotireddy für die Unterstützung danken, während der Dreharbeiten.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Bacto-Peptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) | |
| Glucose |
Riferimenti
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