液相亲和捕获试验用磁珠研究蛋白质相互作用：脊髓灰质炎病毒的Nanobody范例
Summary
在这篇文章中，提出了一个简单，定量，液相亲和力捕获检测。这是一个可靠的技术基础上，一方面与亲和力之间的标记蛋白，对其他的第二个标记蛋白（如脊髓灰质炎病毒）之间的磁珠和标签蛋白（如纳米抗体）的相互作用。
Abstract
在这篇文章中，提出了一个简单，定量，液相亲和力捕获检测。提供一种蛋白质，可以用来标记和标记的另一种蛋白质，这种方法可以实现蛋白质相互作用的调查。它是基于一个钴磁珠标记蛋白的识别和标签蛋白和标记的第二个特定蛋白质之间的相互作用，另一方面手。首先，标记和标签的蛋白质混合，在室温下孵育。磁珠，识别标签，添加和标记蛋白结合部分分开绑定使用磁铁的分数。被捕获的标记蛋白量可确定以间接的方式，通过测量的标记蛋白的信号仍然在绑定分数。描述液相亲和力检测是非常有用的，当敏感蛋白的构象转化的屁股ayed。检测的发展和应用，证明认识到纳米抗体1的脊髓灰质炎病毒和脊髓灰质炎病毒之间的相互作用。由于脊髓灰质炎病毒是敏感的构象转化2时，附着在固体表面（未发表结果），ELISA法的使用是有限的，因此，应优先考虑液相系统。液相基于polioresearch 3,4经常使用的系统的一个例子是一个免疫试验5微蛋白。即使这个测试已经证明了它的适用性，它需要一个FC结构，这是在纳米抗体6,7缺席。然而，作为另一个机会，这些有趣的和稳定的单域抗体可以很容易地设计不同的标签。广泛使用（他）6标记显示为二价离子，如镍，钴，可以在轮到他们可以轻松地在磁珠表面的亲和力。因此，我们开发了这个简单的定量基于钴磁珠亲和捕获检测。脊髓灰质炎病毒35 S的标记，使入无人之境的互动与纳米抗体，并做出了定量的检测可行的。方法是易于执行，并可以以较低的成本，这是有效再生磁珠的可能性进一步支持建立。
Protocol
Discussion
在协议的相互作用抗原与nanobody的放射性被定义为放射性病毒上清损失。因此沉淀放射性（= 100 – ％）金额（绑定向磁珠）可以以间接的方式，由上清（％）放射性估计。另一方面，它也有可能在500 mM咪唑洗脱从磁珠免疫复合物的直接的方式来测量放射性沉淀的抗原结合部分。它以前被证明是有放射性物质的总量和上清和沉淀分数发现放射性的总和之间的完美匹配。因此，它是可以接受的和节省?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者感谢医药生物技术和分子生物学的部门和工作人员，特别是莫妮克德Pelsmacker编制放射性标记的病毒。我们感谢埃伦MERCKX和Hadewych Halewyck有趣的发言和讨论，并以他在实验室的帮助下格里特德Bleeser。这项工作是由布鲁塞尔自由大学（OZR1807）的全宗，voor Wetenschappelijk Onderzoek Vlaanderen（G.0168.10N）和世界卫生组织（TSA的200410791）OZR批财政支持。莉莎好德是博士前的全宗，voor Wetenschappelijk Onderzoek Vlaanderen（FWO）研究员。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Dynabeads His-Tag Isolation and Pulldown | Invitrogen | 101.03D | Magnetic beads |
| Optiphase ‘HiSafe’ 2 | Perkin Elmer | 1200 – 436 | Scintillation fluid |
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