Il glaucoma è caratterizzato da danni alle cellule gangliari retiniche. L'induzione del glaucoma in modelli animali può fornire informazioni sullo studio di questa malattia. Qui, descriviamo una procedura che induce la perdita di RGC in un modello di ratto in vivo e dimostra la preparazione di retine a montaggio intero per l'analisi.
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Articolo metodologico
Glaucoma inducono Procedura in un
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il glaucoma è una malattia del sistema nervoso centrale che colpisce le cellule gangliari retiniche (RGC). assoni RGC che costituiscono il nervo ottico portano input visivo al cervello per la percezione visiva. Danni alle RGCs e ai loro assoni porta alla perdita della vista e / o cecità. Anche se la causa specifica del glaucoma è sconosciuto, il fattore di rischio per la malattia è una pressione intraoculare. procedure di glaucoma che inducono in modelli animali sono uno strumento prezioso per i ricercatori che studiano il meccanismo della morte RGC. Tali informazioni possono portare allo sviluppo di trattamenti neuroprotettivi efficaci che potrebbero essere di aiuto nella prevenzione della perdita della vista. Il protocollo in questo documento descrive un metodo per indurre glaucoma - come condizioni in un modello di ratto in vivo dove 50 ml di 2 M salina ipertonica viene iniettato nel plesso venoso episclerale. Sbiancamento dei vasi indica iniezione di successo. Questa procedura provoca la perdita di RGCs per simulare il glaucoma. Un mese dopoiniezione, animali vengono sacrificati e gli occhi vengono rimossi. Successivamente, la cornea, lenti, e vitreo vengono rimossi per fare un oculare. La retina è poi sfogliato dalla parte posteriore dell'occhio e appuntato su piatti Sylgard utilizzando aghi di cactus. A questo punto, i neuroni della retina possono essere colorati per l'analisi. I risultati di questo laboratorio mostrano che circa il 25% dei RGCs sono persi entro un mese della procedura rispetto ai controlli interni. Questa procedura consente di analisi quantitativa di morte delle cellule gangliari della retina in un modello di topo di glaucoma in vivo.
Introduzione
Il glaucoma è un gruppo di malattie oculari che colpiscono i neuroni nella retina, in particolare, le cellule gangliari retiniche 1-2. Gli assoni di queste cellule convergono per diventare il nervo ottico che trasportano informazioni visive al cervello in cui viene percepita la visione. Danni alle RGCs e le loro assoni provoca quindi difetti visivi.
Le caratteristiche principali associati a disturbi glaucoma sono RGC degenerazione e la morte, aumento della pressione intraoculare (IOP), e coppettazione disco ottico e atrofia. Queste caratteristiche portano alla perdita del campo visivo o totale, la cecità irreversibile. Attualme....
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Protocollo
Tutte le procedure che utilizzano soggetti animali sono stati in conformità con gli standard dell'Istituto di cura degli animali e del Comitato uso (IACUC) alla Western Michigan University.
1. Gli animali
- Utilizzare i ratti maschi e femmine 3 mesi di età in questo studio.
- Mantenere gli animali in un ciclo di 12 ore luce / buio con libero accesso a cibo e acqua.
2. Preparazione di KAX Cocktail per anestesia degli animali
- Sciogliere 50 mg di xilazina (20 mg / ml) in 5 ml di ketamina (100 mg / ml) con 1 ml acepromazine (10 mg / ml) e 3 ml di acqua distillata. Mescolare ac....
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Risultati
Questa sezione illustra i componenti apparecchiature e procedure utilizzate per indurre condizioni di glaucoma, come in un topo modello di glaucoma in vivo. Mostriamo i singoli strumenti e delle attrezzature utilizzate per eseguire una iniezione salina ipertonica che provoca un aumento della pressione intraoculare. Mostriamo l'iniezione nel plesso venoso episclerale con il suo effetto scottatura caratteristico e l'aspetto torbido della camera anteriore risultante. Abbiam.......
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Discussione
Questo protocollo descrive un metodo per indurre condizioni glaucoma simile in un modello in vivo di ratto in. Questa procedura utilizza una iniezione di soluzione salina ipertonica per indurre cicatrici nel trabecolato 29, 32. Sviluppare tessuto cicatriziale occlude il deflusso dell'umore acqueo che aumenta la pressione nella camera anteriore. Con diminuito deflusso e la pressione si accumulano, la lente sospesa da legamenti elastici spinge indietro nella camera vitrea. vitreo poi appli.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno interessi in conflitto o in competizione da rivelare.
Ringraziamenti
C. Linn è supportato da una sovvenzione NIH (NIH NEI EY022795).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Xilazina cloridrato, minimo 99% | Sigma, Life Science | X1251-1G | |
| Ketamina cloridrato iniezione, USP, 100 mg/ml | Putney, Inc | NDC 26637-411-01 | Flacone da 10 ml |
| Acepromazina Maleato, 10 mg/ml | Phoenix Pharmaceutical, Inc | NDC 57319-447-04, 670008L-03-0408 | Flacone da 50 ml |
| Flacone di siero, VWR da 10 ml | 16171319 | Vetro borosilicato | |
| Siringa da insulina da 1 ml. | Ago VWR | BD329410 | 28 G |
| Cloruro di sodio | Sigma | S7653 | Soluzione 2 M |
| Estrattore per microelettrodi | Narishige Group | PP-830 | |
| Tubi in borosilicato standard e a parete sottile lucidati pesante | Sutter Instruments | B150-86-10HP | da 0,86 mm |
| per il riempimento di micropipette | World Precision Instruments, Inc | MF28G | |
| Ago Luer-Lock calibro 18 | Fisher Scientific | 1130421 | Ago per siringa |
| polietilene | Fisher Scientific | 22046941 | 0,034 pollici di diametro, circa 10 pollici... |
| Soluzione oftalmica di proparacaina cloridrato, USP, 0,5% | Akorn, Inc | NDC 17478-263-12 | 15 ml flacone sterile |
| Forbici curve | Strumenti di scienze fini | 14061-11 | |
| Microscopio | Leica | StereoZoom 4 | |
| Fine Science Tools | 1310912 | bordo curvo | |
| Triplo unguento antibiotico | Fisher Scientific | NC0664481 | |
| Manico per bisturi | Strumenti per la scienza | 10004-13 | |
| Lama per bisturi #11 | Strumenti per la scienza fine | 10011-00 | |
| Piastra di Petri monouso 60 mm x 15 mm | VWR | 351007 | |
| salina tamponata con fosfato 10x Concentrato | Sigma, Life Science | P7059-1L | 1x diluizione |
| Forbici a molla | Strumenti di scienza fine | 15009-08 | |
| Pinze (2), Dumont # 5 | Fine Science Tools | 11251-30 | |
| Pipette di trasferimento da 3 ml, polietilene, non sterili | BD Biosciences | 357524 o 52947-948 | Graduazioni da 1 e 2 ml |
| 35 mm x 10 mm Piastra di Petri Easy Grip... | BD Biosciences | 351008 | |
| Sylgard 184 | VWR | 102092-312 | |
| cactus | |||
| Paraformaldeide | EMD Millipore | PX0055-3 o 818715.0100 | Trasformato in una soluzione al 4% |
| Triton X-100 | Sigma | T9284-100 ml | Trasformato in una soluzione all'1% e allo 0,1% |
| Siero fetale bovino | Atlanta Biological | S11150 | 500 ml |
| Topo Purificato Anti-Rat CD90/topo CD90.1 | BD Pharmingen | Cat 554892 | diluizione 1:300 |
| Alexa Fluor 594 capra anti-topo | Tecnologie per la vita | A11005 | Diluizione 1:300 |
| Vetrini per microscopio | Corning | 2948-75x25 | |
| Glicerolo | Sigma | G5516-100 ml | 50% di glicerolo al 50% di PBS, in peso |
| Vetro di copertura | Corning | 2975-225 | Spessore 1 22 x 50 mm |
| Microscopio confocale | Nikon | C2 Eclipse Ti |
Riferimenti
- Goel, M., Picciani, R. G., Lee, R. K., Bhattacharya, S. K. Aqueous Humor Dynamics: A Review. Open Ophthalmol. J. 4, 52-59 (2010).
- Thylefors, B., Negrel, A. D. The global impact of glaucoma. Bull. World Health Organ. 72 (3), 323-326 (1994).
- Thylefors, B., Negrel, A. D., Pararajasegaram, R., Dadzie....
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Ristampe e permessi
