Summary
यह लेख एक अभिनव मुंह गैग का उपयोग कर चूहों में एक pulpitis मॉडल की स्थापना के लिए एक सुव्यवस्थित प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है, बाद में हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण के बाद.
Abstract
पल्पिटिस, प्राकृतिक दांतों के नुकसान का एक सामान्य कारण, सूजन वाले दंत लुगदी में परिगलन और बायोएक्टिविटी के नुकसान की ओर जाता है। pulpitis अंतर्निहित तंत्र को सुलझाना और इसके कुशल उपचार endodontic अनुसंधान के एक सतत ध्यान केंद्रित है. इसलिए, लुगदी संरक्षण में सुधार के लिए दंत लुगदी के भीतर भड़काऊ प्रक्रिया को समझना महत्वपूर्ण है। इन विट्रो प्रयोगों में अन्य की तुलना में, एक murine pulpitis मॉडल pulpitis पल्पिटिस की रोग प्रगति का निरीक्षण करने के लिए एक अधिक प्रामाणिक और आनुवंशिक रूप से विविध संदर्भ प्रदान करता है. हालांकि, चूहों का उपयोग करना, उनकी लागत-प्रभावशीलता और पहुंच के बावजूद, उनके छोटे आकार, खराब समन्वय और कम सहनशीलता के कारण कठिनाइयों का सामना करना पड़ता है, जो इंट्राओरल और दंत प्रक्रियाओं को जटिल बनाता है। यह प्रोटोकॉल माउस लुगदी को उजागर करने के लिए एक उपन्यास डिजाइन और मुंह-गैग के अनुप्रयोग का परिचय देता है, जिससे अधिक कुशल इंट्राओरल प्रक्रियाओं की सुविधा मिलती है। माउथ-गैग, जिसमें अधिकांश दंत चिकित्सकों के लिए आसानी से उपलब्ध दंत आर्च शामिल है और पहली बार प्रक्रियाओं के लिए भी सर्जिकल तैयारी में काफी तेजी ला सकता है। माइक्रो-सीटी, हेमेटोक्सिलिन-ईोसिन (एचई) धुंधला हो जाना, और इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला आकृति विज्ञान और सेल अभिव्यक्ति में परिवर्तन की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। इस लेख का उद्देश्य शोधकर्ताओं को इस उपन्यास मुंह-गैग का उपयोग करके लुगदी सूजन मॉडल बनाने के लिए एक अधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और कम मांग वाली प्रक्रिया स्थापित करने में मदद करना है।
Introduction
दंत लुगदी, दांत का एक अभिन्न अंग, पोषक तत्वों की आपूर्ति, डेंटिन गठन, संवेदी कार्य, औररक्षा प्रतिक्रियाओं जैसे कई आवश्यक कार्यों के लिए जिम्मेदार है। फिर भी, दंत लुगदी, कठोर ऊतक से घिरा हुआ, गहरी क्षय, पल्पिटिस, आघात, या बाद के उपचारों 2,3 से चोटों और क्षति के लिए अतिसंवेदनशील होता है। कार्यात्मक दंत लुगदी की अनुपस्थिति दांत नाजुकता का खतरा बढ़ जाताहै 4. इसके अलावा, युवा स्थायी दांतों में लुगदी जीवन शक्ति का नुकसान दांतों की परिपक्वता पर प्रतिकूल प्रभाव डाल सकता है, और वर्तमान डेन्चर तकनीक स्वस्थ लुगदी4 द्वारा दी गई तंत्रिका प्रतिक्रिया को बहाल करने में विफल रहती है। इस स्थिति ने शोधकर्ताओं को केवल हटाने से परे सूजन वाले लुगदी के प्रबंधन के लिए वैकल्पिक समाधान तलाशने के लिए प्रेरित किया है।
में 2007, मरे एट अल. पुनर्योजी endodontics में ऊतक इंजीनियरिंग के आवेदन की शुरुआत की, जिससे लुगदी संरक्षण और उत्थान में रुचि बढ़ गई5. हालांकि, सूजन लुगदी ऊतक एक चुनौती बन गया है के रूप में कोशिकाओं आईएल -6, जो भड़काऊ कोशिकाओं की भर्ती और सेल परिगलन में परिणाम, लुगदी जीवन शक्ति की हानि, और कार्यात्मक वसूली 6,7 में जटिलताओं के रूप में जारी करता है. सूजन और संबंधित कोशिका मृत्यु को समझना, इसलिए, महत्वपूर्ण लुगदी के संरक्षण में प्रगति के लिए महत्वपूर्ण है। वहाँ प्रयोगों है कि विवो में या इन विट्रो 8,9 में सूजन लुगदी के आणविक जीव विज्ञान का पता लगाने के लिए आयोजित किया गया है की एक संख्या रहे हैं. हालांकि 2 डी या 3 डी सेल संस्कृतियों की तरह इन विट्रो प्रयोगों में साल के लिए विकसित किया गया है और परिपक्व और व्यापक रूप से भड़काऊ कारकों के लिए लुगदी कोशिकाओं की प्रतिक्रियाओं का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है, इन प्रयोगों लुगदी ऊतक और प्रणालीगत प्रतिरक्षा प्रणाली10 के बीच बातचीत को प्रतिबिंबित नहीं कर सकते. यदि अध्ययन की जा रही घटना प्रतिरक्षा, संवहनी और तंत्रिका तंत्र जैसे अन्य ऊतक मूल की कोशिकाओं से ली गई है, तो शुद्ध लुगदी कोशिका संस्कृति एक मृत अंत की ओर ले जाएगी। इसलिए, विवो प्रयोगों में बहुत आवश्यक और संदर्भित हैं।
चूहे अपनी लागत-प्रभावशीलता, उच्च प्रजनन क्षमता और जीवन शक्ति के कारण विवो में सूजन अनुसंधान में तेजी से एक आम विकल्प बन गए हैं। हालांकि, चूहों pulpitis मॉडल के लिए एक व्यापक प्रोटोकॉल एक संदर्भ के रूप में सेवा कर सकते हैं जो वर्तमान में अनुपस्थित है. चूहों के छोटे आकार और उत्तेजना के प्रति उनकी संवेदनशीलता प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के दौरान महत्वपूर्ण चुनौतियों का सामना करती है। माउस मुंह के भीतर गहरी छुपा छोटे दांतों का अवलोकन अक्सर एक ब्रैकट माइक्रोस्कोप के उपयोग की आवश्यकता होती है, प्रयोगशालाओं में डेस्कटॉप माइक्रोस्कोप की अधिक सामान्य उपस्थिति के बावजूद। माउथ ओपनर की अनुपस्थिति में दूसरों की सहायता की आवश्यकता होती है। इसे संबोधित करने के लिए, समूह ने आसानी से उपलब्ध सामग्रियों का उपयोग करके एक माउथ-गैग तैयार किया है जिसका उद्देश्य चूहों पल्पाइटिस मॉडल के निर्माण के लिए एक मानकीकृत और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रोटोकॉल प्रदान करना है। यह लेख प्रक्रिया का विवरण, पूर्व शल्य चिकित्सा तैयारी, स्थिरीकरण, लुगदी जोखिम सर्जरी, और C57 चूहों पर नमूना संग्रह को कवर. यह प्रोटोकॉल माउथ-गैग के उपयोग की सिफारिश करता है, प्रक्रिया को दोहराने में अन्य शोधकर्ताओं की सुविधा के लिए इसकी संरचना, उत्पादन और आवेदन के बारे में जानकारी प्रदान करता है।
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Protocol
इस अध्ययन में प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं को वेस्ट चाइना स्कूल ऑफ स्टोमैटोलॉजी, सिचुआन विश्वविद्यालय (WCHSIRB-D-2021-125) की नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। वयस्क C57BL/6 चूहों को Gempharmatech प्रायोगिक पशु कंपनी, चेंगदू, चीन से प्राप्त किया गया था। मैक्सिलरी की पहली दाढ़ का पूरा मुकुट जन्म के 21 दिन बाद फूट जाता है। सर्जरी के लिए चूहे सामान्य जीवन शक्ति11 के साथ 21 दिनों से अधिक पुराना होना चाहिए. यहां 6 से 8 हफ्ते के चूहों को मॉडलिंग के लिए इस्तेमाल किया गया। चित्रा 1 एक प्रवाह आरेख प्रोटोकॉल इस्तेमाल दिखा रहा है.
1. प्रीऑपरेटिव तैयारी (चित्रा 2)
- निम्नलिखित उपकरणों को प्राप्त करें: त्रिविम माइक्रोस्कोप, फिक्सिंग प्लेट, मेडिकल टेप, मुंह-गैग, 0.6 मिमी के व्यास के साथ न्यूनतम इनवेसिव दंत गड़गड़ाहट, दंत उच्च गति दंत हैंडपीस, 8 # सी + फ़ाइल, हीटिंग पैड, 1 एमएल सिरिंज, बाँझ कपास की गेंद, आंख संदंश।
- निम्नलिखित दवाएं प्राप्त करें: संज्ञाहरण मिश्रण, पशु चिकित्सा मरहम।
2. माउथ-गैग की तैयारी
- वजन और संज्ञाहरण मिश्रण समाधान (10% केटामाइन हाइड्रोक्लोराइड + 5% xylazine + 85% बाँझ isotonic खारा) के intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा शरीर के वजन के 0.007 एमएल / जी पर माउस anesthetize और पैर की अंगुली चुटकी विधि के माध्यम से उचित संवेदनाहारी की पुष्टि. ऑपरेशन के दौरान निर्जलीकरण के कारण आंखों की चोट को रोकने के लिए आंखों पर नेत्र चिकनाई मरहम लागू करें।
नोट: चिकित्सा टोपी, मास्क, दस्ताने और चौग़ा और अन्य बुनियादी सुरक्षा आवश्यक हैं। सुनिश्चित करें कि सर्जरी पर्यावरण और माउस कक्ष दोनों स्वच्छ और सुरक्षित हैं। पूरी प्रक्रिया में थर्मल समर्थन के लिए एक हीट पैड आवश्यक है। - नीचे वर्णित के रूप में मुंह गैग तैयार करें (चित्र 3)।
- निम्नलिखित सामग्री प्राप्त करें: 8 माइक्रोन के व्यास के साथ ऑर्थोडोंटिक आर्क तार, युवा लूप झुकने वाला सरौता, भारी तार कटर, मार्कर पेन, 3 मिमी की लंबाई के साथ रबर कैप और 1 मिमी का क्रॉस सेक्शन व्यास।
- सबसे पहले, निर्धारण और अंगूठे के लिए बाएं हाथ से आर्च तार को सीधा करें, दाएं हाथ की तर्जनी तार के चाप के खिलाफ थोड़ा झुकें। इस क्रिया को कई बार दोहराएं, यह सही त्रि-आयामी कोण पर झुकने की सुविधा प्रदान करेगा।
- धनुष तार के मध्य बिंदु पर लगभग 8 मिमी लंबा ट्रेपोज़ॉइड (चित्रा 3 सी, ए-एल-के-बी) के शीर्ष किनारे (चित्रा 3 जी, ए-आई) को मोड़ने के लिए योंग लूप झुकने वाले प्लायर का उपयोग करें। सुनिश्चित करें कि बिंदु ए (चित्रा 3) प्लायर चोंच के किनारे पर है।
- बाएं हाथ से सरौता पकड़ें, धनुष के तार के मुक्त सिरे को दाहिने अंगूठे और तर्जनी से जकड़ें, और धनुष के तार को बिंदु A से मोड़कर लगभग 120° का कोण बनाएं। बिंदु मैं (चित्रा 3 जी) पर पिछले कार्रवाई डुप्लिकेट. जांचें कि क्या आर्क तार एक तल पर है, इसे बिना चुभने के क्षैतिज मेज पर रखकर।
- प्रत्येक तरफ लंबाई के बारे में 9 मिमी छोड़ दें (चित्रा 3 डी, एबी, एल-के) और प्रत्येक किनारे को सुनिश्चित करते हुए चरण 2.2.4 के समान कौशल का उपयोग करके 75 डिग्री कोण पर मुक्त अंत को मोड़ें एक विमान। इस तीव्र कोण को प्लायर चोंच की नोक से मोड़ें।
- बिंदु b से लगभग 5 मिमी दूर बिंदु c ज्ञात कीजिए। बिंदु c पर 105° कोण मोड़ने के लिए उसी कौशल का पालन करें। बिंदु c से बिंदु d 5mm पर एक और 105° कोण मोड़ें। बिंदु d से लगभग 4.5 mm छोड़ें और बिंदु e ज्ञात कीजिए। बिंदु ई पर मुक्त अंत मोड़ें के बारे में 100 -105 डिग्री (चित्रा 3E) के कोण बनाने के लिए.
नोट: हमारे द्वारा उपयोग किए जाने वाले 6-8 सप्ताह पुराने C57 चूहों के बारे में 20 ग्राम थे। 5 मिमी की दूरी न केवल बिना हिले चूहों के ऊपरी और निचले जबड़े को जाम कर सकती है, बल्कि चूहों की त्वचा को भी नहीं दबाएगी और असुविधा का कारण बनेगी। यदि अन्य प्रजातियों या चूहों की उम्र का उपयोग किया जाता है, तो कृपया वास्तविक स्थिति(चित्रा 3ई,जी)के अनुसार सी-डी और आई-एच भागों की लंबाई समायोजित करें। - मैंडिबुलर भाग के लिए एक अतिरिक्त जीभ डिप्रेसर मोड़ें (चित्र 3जी, जे-आई-एच-जी)।
- l-k-j भाग पर a-b-c भाग के डुप्लिकेट झुकने वाले चरण। एक ही समय में i-k और k-j भागों को दबाएं और इसे i-k-j विमान के लंबवत बनाने के लिए बिंदु j पर मुक्त अंत को मोड़ें। क्लैंप बिंदु मैं जो बिंदु जे से 5 मिमी है, इसे आई-के-जे विमान और सी-डी भाग(चित्रा 3एच)दोनों के समानांतर बनाने के लिए मुक्त अंत को मोड़ें।
- बिंदु i से 5 मिमी लंबाई छोड़ दें, बिंदु h पर, आर्क को ऊर्ध्वाधर i-h भाग में मोड़ें और j-i-h विमान के समानांतर मोड़ें। बिंदु h से 5 मिमी पर बिंदु g ज्ञात कीजिए। जे-आई-एच-जी विमान को दबाना और मुक्त अंत सममित को के-जे भाग में मोड़ना। फिर बिंदु एफ के बाद मुक्त अंत बिंदु ई-मुक्त अंत(चित्रा 3एच)के सममित होना चाहिए।
- मुक्त अंत (चित्रा 3 एफ) पर रबर कैप रखो।
3. स्थिरीकरण
- त्वचा टेप द्वारा सुरक्षित अंगों के साथ निर्धारण प्लेट पर माउस लापरवाह को ठीक करें। अंगूठे और तर्जनी के साथ मुंह-गैग के मुक्त सिरों को संपीड़ित करें।
- दो हथियारों के समलम्बाकार नाली में माउस सामने incisors को ठीक करें. सुनिश्चित करें कि जीभ डिप्रेसर वाला हाथ मंडीबुला के लिए है। यह सुनिश्चित करने के लिए मुंह-गैग को समायोजित करें कि माउस की जीभ स्थिर है लेकिन इस्केमिक नहीं है।
4. दांत का आकलन
- सुनिश्चित करें कि सर्जरी के लिए मैक्सिलरी पहली दाढ़ दंत क्षय, आघात और ओडोन्टोजेनेसिस से मुक्त होनी चाहिए। सुनिश्चित करें कि आसपास के मसूड़े पर कोई लालिमा, सूजन या नालव्रण नहीं है। सुनिश्चित करें कि विपरीत दांत स्वस्थ हैं और स्वस्थ नियंत्रण समूह के रूप में कार्य करने के लिए उपलब्ध हैं।
5. पल्प एक्सपोजर
- 20,000 आरपीएम की गति से मैक्सिलरी पहले दाढ़ के संरोधक पक्ष पर ड्रिल करने के लिए दंत गड़गड़ाहट का उपयोग करें। सुनिश्चित करें कि तामचीनी हटा दी गई है। दंत लुगदी ऊतक12 पर अत्यधिक थर्मल उत्तेजना को रोकने के लिए दंत चिकित्सा की उथली परत में केवल दंत चिकित्सा हैंडपीस के साथ आपरेशन रखें.
- एक ही समय में, ऑपरेशन के दौरान हर 3 मिनट दांत पर सामान्य खारा ड्रॉप करने के लिए एक सिरिंज का उपयोग करके अति ताप को रोकने के लिए.
- ड्रिल किए गए गड्ढे की सबसे निचली स्थिति पर 8 # या 10 # सी + फ़ाइल डालें और लुगदी कक्ष को उजागर करने के लिए अंतिम डेंटाइन के माध्यम से छेद करें। यह गिरने की एक स्पष्ट भावना होगी जब स्थानीय डेंटाइन को पूरी तरह से हटा दिया जाएगा। बहुत गहरी जांच न करें, या दंत लुगदी ऊतक लुगदी कक्ष से बाहर लाया जा सकता है।
- दांत के आसपास के टुकड़ों को साफ करें। मुँह का गैग उतारो; सर्जरी खत्म हो गई है। ऑपरेशन के बिना नियंत्रण के रूप में विपरीत मैक्सिलरी पहले दाढ़ का उपयोग करें।
6. पोस्ट-ऑपरेटिव देखभाल
- सर्जरी के बाद, कार्प्रोफेन (5 मिलीग्राम/किग्रा) को चमड़े के नीचे प्रशासित करें और संज्ञाहरण से वसूली तक एक प्रवण स्थिति में केमोथर्मल हीटिंग पैड पर माउस रखें। चूहों को खाना खिलाएं और पीने का पानी दें। पुनर्प्राप्ति प्रक्रिया की निगरानी की जानी चाहिए। कोई अन्य जानवरों एक ही कक्ष में होना चाहिए जब तक माउस पूरी तरह से बरामद है.
7. नमूना संग्रह और भंडारण
- प्रयोग 9 के अनुसार ऑपरेशन या किसी अन्य समय बिंदु के बाद गहरी संवेदनाहारी हालत 24 घंटे के तहत गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था के साथ माउस इच्छामृत्यु. नेत्र कैंची के साथ मैक्सिला और जाइगोमा से जुड़ी कंकाल की मांसपेशियों को काटें। कंकाल, ललाट की हड्डी और नरम ऊतक निकालें और मैक्सिलरी दाढ़ के साथ लैमिना gnathostegite को बाहर निकालें।
नोट: वह एट अल के अनुसार, यह सराहना की है कि pulpitis नमूना कम से कम सर्जरी के बाद 13 दंत लुगदी ऊतक13 में व्यापक परिगलन से बचने के लिए एकत्र किया जाना चाहिए. - आधे में gnathostegite बाण के समान रूप से विभाजित करें और ऊतक को पीबीएस, पीएच 7.4 में 4% पैराफॉर्मेल्डिहाइड में 24h-निर्धारण के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत करें।
8. हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण
- फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) के साथ ऊतक धो लें और उन्हें 5% ईडीटीए के दैनिक परिवर्तित डीकैल्सीफिकेशन समाधान में और पीबीएस, पीएच 7.4 में 4% सुक्रोज में, 2-4 सप्ताह10 के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर डिकैल्सीफाई करें।
- पैराफिन में 1/2 gnathostegite एम्बेड करें और सुनिश्चित करें कि दांतों के बिना धनु चेहरा ऊतक कैसेट के तल पर है।
- पैराफिन ब्लॉक को पैराफिन माइक्रोटोम के साथ 5 माइक्रोन मोटी स्लाइस में काटें। समीपस्थ, दूर, ऊपरी और साथ ही माइक्रोस्कोप के तहत मनाया संबंध के अनुसार पैराफिन ब्लॉक के कोण को समायोजित करने के लिए पूरा मुकुट लुगदी और पहले दाढ़ के छिद्र में कटौती की जा सकती है.
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Representative Results
ऊपर वर्णित प्रक्रिया 3, 6-8 सप्ताह पुराने C57BL/6 चूहों के दाहिने मैक्सिलरी पहले दाढ़ पर की गई थी, जबकि बाएं मैक्सिलरी पहले दाढ़ को नियंत्रण के रूप में संरक्षित किया गया था। रिक्त नियंत्रण से ऊतक विज्ञान और इम्यूनोफ्लोरेसेंस परिणाम, प्रदर्शन के लिए 12 घंटे पल्पाइटिस और 24 घंटे पल्पिटिस नमूनों का उपयोग किया गया था।
गोल्डमैन एट अल 15 से सीटी विश्लेषण के प्रोटोकॉल के बाद, लुगदी जोखिम चित्रा 4 एसी में माइक्रो सीटी और पुनर्निर्माण मॉडलिंग के माध्यम से पुष्टि की गई थी. मैक्सिलरी पहले दाढ़ के धनु स्लाइस, दोनों नियंत्रण और सर्जरी पक्षों से, एचई धुंधला (चित्रा 5) से गुजरना पड़ा। घाव मार्जिन पर पल्प ऊतक परिगलन और सेल आकृति विज्ञान विघटन दिखाया गया था। परिगलन मुख्य रूप से वेध के पास लुगदी ऊतक में केंद्रित था, और बंद पक्ष पर लुगदी ऊतक का आकार सामान्य था। 24 घंटे में, जड़ लुगदी सहित अधिकांश लुगदी ऊतक, रूपात्मक रूप से बरकरार थे। (चित्र 5)।
आईएल -614 की अभिव्यक्ति नियंत्रण में कम थी, और आईएल -6 की एक छोटी मात्रा 12 घंटे में घाव के आसपास देखी जा सकती थी, जबकि आईएल -6 की अभिव्यक्ति 24 घंटे में काफी बढ़ गई थी। इसके अलावा, आईएल -6 की अभिव्यक्ति मुख्य रूप से घाव मार्जिन और मध्य लुगदी सींग (चित्रा 6) में केंद्रित थी। चित्रा 6 डी, ई में, आईएल -6 + दंत लुगदी कोशिकाओं की संख्या और आईएल -6 + कोशिकाओं का अनुपात कुल दंत लुगदी कोशिकाओं में तीन समय बिंदुओं में समय के साथ बढ़ता है। यह माना जा सकता है कि क्षेत्र धीरे-धीरे सूजन विकसित करता है और लुगदी के संपर्क में आने के बाद बढ़ जाता है।
हमने 5 सहयोगियों को आमंत्रित किया जिन्होंने माउस (स्टेज 1) के ऊपरी और निचले जबड़े को स्थिर करने के लिए आवश्यक अपने समय की गणना करने के लिए C57 चूहों के मैक्सिलरी दांतों पर सर्जरी कभी नहीं की है और दो रबर बैंड के साथ पारंपरिक प्रक्रिया के बाद माउस मैक्सिलरी पहले दाढ़ (स्टेज 2) का पर्दाफाश किया है।. माइक्रोस्कोप के तहत माउस मैक्सिलरी पहले दाढ़ पर ड्रिल को सही ढंग से रखने के लिए समय भी विश्लेषण के लिए गणना की गई थी। चित्रा 3 जे, के में परिणाम ने सुझाव दिया कि मुंह निर्धारण का समय और मुंह-गैग के साथ चूहों मैक्सिलरी पहले दाढ़ को खोजने के लिए पारंपरिक तरीके (पी<0.05) की तुलना में काफी छोटा किया गया था। माउथ-गैग के उपयोग से ऑपरेशन दक्षता में सुधार हो सकता है और ऑपरेशन की कठिनाई कम हो सकती है।
चित्रा 1: लुगदी जोखिम प्रक्रिया के प्रवाह आरेख। (ए) मुंह गैग के साथ निर्धारण के बाद, माउस की मैक्सिलरी पहली दाढ़ को माइक्रोस्कोप के नीचे पूरी तरह से उजागर किया जाना चाहिए। (बी) पहले दाढ़ के ओसीसीएल तामचीनी और सतही डेंटिन को हटाने के लिए न्यूनतम इनवेसिव डेंटल के साथ एक उच्च गति वाले दंत हैंडपीस का उपयोग करें, लेकिन सावधान रहें कि ओवरहीटिंग के कारण लुगदी पर अत्यधिक प्रभाव से बचने के लिए सीधे डेंटिन में प्रवेश न करें। (सी) शेष डेंटिन में प्रवेश करने और लुगदी को उजागर करने के लिए 8 # सी + फ़ाइल का उपयोग करें। (डी) सर्जरी के बाद 24 घंटे नमूने एकत्र किए गए थे। एचई और इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला साबित हुआ कि इस समय बिंदु पर एक पल्पाइटिस मॉडल स्थापित किया जा सकता है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: लुगदी जोखिम प्रक्रिया के लिए उपकरण। (ए) त्रिविम माइक्रोस्कोप और दंत उच्च गति दंत हैंडपीस की मोटर। (बी) 8 # सी + फ़ाइल, न्यूनतम इनवेसिव डेंटल गड़गड़ाहट, माउथ-गैग, चिमटी, और दंत उच्च गति दंत हैंडपीस। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 3: माउथ-गैग बनाना। (ए) मुंह-गैग के दो काम करने वाले हथियार बनाने के लिए तार को मोड़ें। (बी-सी) अनिवार्य के लिए जीभ स्पैटुला झुकने के चरण। (डी-ई) मैक्सिला के लिए कोई जीभ स्पैटुला नहीं। (एफ, एच) चोट को चुभने से बचाने के लिए रबर कैप या मुड़े हुए सिरों की आवश्यकता होती है। (छ) संदर्भ के लिए मुख-गैग के तीन दृश्य। (i) माउथ-गैग का नैदानिक उपयोग। (जे) शुरुआती लोगों के लिए क्रमशः पारंपरिक निर्धारण विधि और माउथ-गैग का उपयोग करके ऊपरी और निचले जबड़े (स्टेज 1) को ठीक करने का औसत समय। (के) शुरुआती लोगों के लिए क्रमशः पारंपरिक निर्धारण विधि और माउथ-गैग का उपयोग करके मैक्सिलरी पहले दाढ़ (स्टेज 2) को स्पष्ट रूप से खोजने का औसत समय। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 4: लाल बिंदीदार रेखा द्वारा चिह्नित छिद्र के साथ संचालित मुट्ठी दाढ़ का माइक्रो-सीटी विश्लेषण। (ए) दांत के धनु विमान, सुनिश्चित करें कि लुगदी-कक्ष फर्श पर कोई वेध मौजूद नहीं है। (बी) कोरोनल प्लेन। (ए) में वेध के अनुरूप, लाल बिंदीदार रेखा के साथ परिक्रमा तामचीनी डेंटिन का पूरा प्रवेश देखा जा सकता है। (सी) सीटी पुनर्निर्माण मॉडल का संरोधक विमान। लाल बिंदीदार रेखा के साथ परिक्रमा वेध के स्थान की पुष्टि अधिक सहज तरीके से की जाती है और लुगदी कक्ष के फर्श को वेध के माध्यम से देखा जा सकता है। (डी-जी) उपचार की इंट्राऑपरेटिव तस्वीरें। (डी)माउस की मैक्सिलरी पहली दाढ़ की जांच करें ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि कोई गुहाएं या विकृति नहीं है। (ई) तामचीनी और उथले डेंटिन को हटाने के लिए न्यूनतम इनवेसिव गड़गड़ाहट का उपयोग करना। जैसा कि छवि में देखा जा सकता है, एक गड्ढे (धराशायी सफेद रेखा के साथ परिक्रमा) छिद्र के बिना दांत के संरोधक चेहरे पर देखा जा सकता है। (एफ) शेष डेंटिन में प्रवेश करने के लिए 8 # सी + फ़ाइल का उपयोग करके, फ़ाइल हाथ के समर्थन के बिना दांत में फंस सकती है। (जी) जब फ़ाइल हटा दी जाती है, तो दांत में गुलाबी वेध होता है, जो सफल लुगदी एक्सपोजर का संकेत देता है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 5: हेमेटोक्सिलिन-ईोसिन धुंधला हो जाना। (ए) नियंत्रण के लिए अनुपचारित पहले दाढ़ का समग्र दृष्टिकोण। (ए-1,2,3) पैनल (ए) में 1, 2, 3 के अनुरूप उच्च आवर्धन आंकड़े। 3 पदों पर दंत लुगदी ऊतक का आकार बरकरार था, और ओडोंटोब्लास्ट एक व्यवस्थित व्यवस्था में थे। (बी) सर्जरी के बाद 12 घंटे दांतों का समग्र दृश्य। (बी-1,2,3) पैनल (बी) में 1, 2, 3 के अनुरूप उच्च आवर्धन आंकड़े। स्थिति 1 और 2 पर दंत लुगदी ऊतक का आकार आम तौर पर बरकरार था। परिगलन को वेध के पास देखा जा सकता है। (सी) सर्जरी के बाद 24 घंटे दांतों का समग्र दृश्य। (सी-1,2,3) पैनल (सी) में 1, 2, 3 के अनुरूप उच्च-आवर्धन आंकड़े। परिगलन एक एकल लुगदी सींग से पास के लुगदी ऊतक तक फैला हुआ है। लेकिन जड़ लुगदी सहित अधिकांश लुगदी ऊतक रूपात्मक रूप से बरकरार हैं। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 6: इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला हो जाना। (ए) नियंत्रण के लिए अनुपचारित पहले दाढ़ का समग्र दृष्टिकोण। (ए-1,2,3) पैनल (ए) में 1, 2, 3 के अनुरूप उच्च आवर्धन आंकड़े। आईएल -6 की लगभग कोई अभिव्यक्ति नहीं देखी जा सकती है। (बी) सर्जरी के बाद 12 घंटे दांतों का समग्र दृश्य। (बी -1, 2, 3) पैनल (बी) में 1, 2, 3 के अनुरूप उच्च आवर्धन आंकड़े। आईएल -6 बी -3 में दिखाया छिद्र के पास ऊतक में केंद्रित बढ़ रहा है। बी -1,2 में कोई स्पष्ट परिवर्तन नहीं देखा गया। (सी) सर्जरी के बाद 24 घंटे दांतों का समग्र दृश्य। (सी -1, 2, 3) पैनल (सी) में 1, 2, 3 के अनुरूप उच्च-आवर्धन आंकड़े। आईएल -6 की अभिव्यक्ति सी -2,3 में काफी बढ़ गई थी। (डी)नियंत्रण में आईएल -6 + दंत लुगदी कोशिकाओं की कुल मात्रा, 12 घंटे लुगदी जोखिम, 24 घंटे लुगदी जोखिम इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला परिणाम। (ई)नियंत्रण में दंत लुगदी कोशिकाओं की कुल मात्रा के लिए आईएल -6 + कोशिकाओं का अनुपात, 12 घंटे लुगदी जोखिम, 24 घंटे लुगदी जोखिम इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला परिणाम। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
दांतों के भीतर एकान्त नरम ऊतक के रूप में, दंत लुगदी दांत की बायोएक्टिविटी को बनाए रखने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है लेकिन अत्यधिक संवेदनशील रहती है। इस महत्वपूर्ण लुगदी का संरक्षण हाल ही में एंडोडोंटिक उपचार में पसंदीदा प्रारंभिक दृष्टिकोण बन गया है, दंत लुगदी के भड़काऊ तंत्र की व्यापक समझ की आवश्यकता16. भड़काऊ microenvironment के spatiotemporal उतार-चढ़ाव और pulpitis में निवासी सेल प्रकार के बीच बातचीत इन विट्रो अध्ययन11 में के माध्यम से अपनी जांच जटिल. इसके बजाय, विवो अध्ययन में मनुष्यों में पाए जाने वाले शारीरिक वातावरण की नकल करके लाभ प्रदान करते हैं। प्रयोगात्मक चूहों का उपयोग, विशेष रूप से overexpressed या नीचे दस्तक जीन के साथ, परिकल्पना सत्यापन के लिए एक प्रभावी साधन प्रदान करता है. प्रयोगशालाओं में अक्सर इस्तेमाल किया C57 चूहों, हालांकि, उनके छोटे आकार और समन्वय की कमी के कारण चुनौतियों का पोज, उनके दांतों समस्याग्रस्त17 के लिए उत्तेजनाओं के आवेदन प्रतिपादन. इस मुद्दे को हल करने के लिए, चूहों के मौखिक गुहाओं के भीतर प्रक्रियाओं को करने में शोधकर्ताओं की सहायता के लिए उपन्यास मुंह-गैग की व्यापक व्याख्या की आवश्यकता है। इसके अलावा, यह लेख मुंह-गैग का उपयोग करके चूहों के पहले दाढ़ पर लुगदी एक्सपोजर के माध्यम से एक पल्पाइटिस मॉडल स्थापित करने के लिए प्रोटोकॉल की रूपरेखा तैयार करता है, जिससे बाद के शोध के लिए एक मूल्यवान मार्गदर्शिका प्रदान की जाती है।
कई पुनरावृत्तियों के बाद, एक स्केलेबल माउथ-गैग जो निर्माण के लिए सीधा है, सफलतापूर्वक डिजाइन किया गया था। आयाम और मुंह गैग के एक तीन दृश्य योजनाबद्ध चित्रा 3 में प्रदान की जाती हैं. प्रोटोकॉल ने एक चाप के बदले एक ट्रेपोजॉइडल डिजाइन को अपनाकर तार झुकने की प्रक्रिया को काफी सरल बना दिया। माउथ-गैग 0.8 मिमी व्यास ऑर्थोडोंटिक आर्क तार का उपयोग करता है, जो माउस के मुंह से फिसलन को रोकने और पर्याप्त उद्घाटन बल प्रदान करने की आवश्यकता को संतुलित करता है। इसके अलावा, ऑर्थोडोंटिक आर्क वायर की लोच चूहों के टेम्पोरोमैंडिबुलर जोड़ की सुरक्षा करती है। माउथ-गैग कॉम्पैक्ट है, जंग के लिए प्रतिरोधी है, और बार-बार उपयोग के लिए शराब के साथ 50 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब में संग्रहीत किया जा सकता है। माउस के काटने के दबाव के बावजूद, माउथ-गैग मुंह में स्थिर रहता है, जिससे शोधकर्ताओं को माइक्रोस्कोप के तहत बिना किसी सहायता के संचालित करने की अनुमति मिलती है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि मुंह-गैग के आकार को विभिन्न माउस शरीर के आकार में फिट करने के लिए समायोजित किया जा सकता है। यदि मुंह माउस की सीमा से परे फैला हुआ है, तो टेम्पोरोमैंडिबुलर संयुक्त (टीएमडी) या मैक्सिलोफेशियल मांसपेशियों को चोट से बचने के लिए मुंह-गैग को तुरंत हटा दिया जाना चाहिए।
वह एट अल की रिपोर्ट इंगित करता है कि परिगलन 24 घंटे पोस्ट लुगदी जोखिम का पता लगाया जा सकता है, लुगदी ऊतक के बहुमत के बाद 72 घंटे18 के बाद परिगलित हो रहा है. इसलिए, अत्यधिक मृत कोशिकाओं के कारण अमान्य प्रयोगात्मक निष्कर्ष से बचने के लिए इस 72 घंटे खिड़की के भीतर लुगदी ऊतक को इकट्ठा करना आवश्यक है। लुगदी कक्ष में सी + फ़ाइल डालने जब, दोहराया रोटेशन और गहरी धक्का लुगदी ऊतक को अत्यधिक नुकसान को रोकने के लिए बचा जाना चाहिए. यदि प्रक्रिया के दौरान भारी रक्तस्राव होता है, तो खांसी को रोकने के लिए एक छोटी कपास की गेंद का उपयोग करके रक्त को धीरे से हटाने की सिफारिश की जाती है। ऑपरेशन केवल माउस मैक्सिला के एक तरफ आयोजित किया जाना चाहिए क्योंकि दोनों पक्षों पर एक साथ मॉडलिंग से मॉडल सटीकता पर संभावित नकारात्मक प्रभाव पड़ता है, जिससे आहार सेवन जटिलताओं का कारण हो सकता है। सर्जरी के बाद, यह सलाह दी जाती है कि चूहों को विरोधी भड़काऊ दवाओं या एंटीबायोटिक दवाओं का प्रशासन न करें।
मुंह-गैग, जबकि माउस के मुंह को खुला रखने में प्रभावी है, सर्जिकल साइट से संबंधित सीमाएं हैं। जीभ डिप्रेसर के साथ दबाए गए जीभ द्वारा संरक्षित मैंडिबुलर पोस्टीरियर दांत अक्सर स्पष्ट रूप से दिखाई नहीं देते हैं। इसलिए, प्रक्रिया केवल मैक्सिला दांतों या मैंडिबुलर पूर्वकाल दांतों पर संचालन के लिए उपयुक्त है। यदि सर्जरी 20 मिनट से अधिक हो जाती है, तो माउस को हर 10 मिनट में ब्रेक देने की सिफारिश की जाती है क्योंकि मुंह-गैग की स्थिरता चूहों के रोड़ा बल का विरोध करने पर निर्भर करती है। C57 चूहों, उनके तेजी से प्रजनन और उपलब्धता के लिए चुना, विभिन्न उत्तेजनाओं के प्रति संवेदनशील हैं; इसलिए, दवाओं या उत्तेजनाओं का थोड़ा ओवरडोज घातक हो सकता है। इसके अलावा, उनके दांतों के छोटे आकार को ऊतक टुकड़ा करने की क्रिया के लिए उच्च कौशल स्तर की आवश्यकता होती है।
अंत में, लुगदी की सूजन और परिगलन लुगदी पुनर्जनन में दबाव चुनौतियों का प्रतिनिधित्व करते हैं। यह अध्ययन चूहों में एक पल्पाइटिस मॉडल बनाने का एक व्यापक प्रदर्शन प्रदान करता है, जिसमें इम्यूनोफ्लोरेसेंस परिणाम भड़काऊ कारकों की पुष्टि करते हैं। यह लेख एक उपन्यास, सुविधाजनक माउथ-गैग डिज़ाइन का प्रस्ताव करता है, जो ऑपरेटर को जीभ के हस्तक्षेप के बिना माउस के मुंह को खुला रखकर अबाधित दृष्टि प्रदान करता है। हालांकि, मैंडिबुलर पोस्टीरियर दांतों पर ऑपरेशन एक चुनौती बनी हुई है। प्रयोगात्मक चूहों का उपयोग करने के फायदे को ध्यान में रखते हुए, चूहों में endodontic मॉडलिंग महत्वपूर्ण वादा रखती है, और यह तकनीकी दहलीज में आगे कटौती की आशा करने की योजना बनाई है.
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Disclosures
लेखक हितों के टकराव की घोषणा नहीं करते हैं।
Acknowledgments
इस अध्ययन को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना U21A20368 (L. Y.), 82101000 (H. W.), और 82100982 (F. L.) और सिचुआन साइंस एंड टेक्नोलॉजी प्रोग्राम 2023NSFSC1499 (H. W.) के अनुदान से वित्त पोषित किया गया था। सभी मूल डेटा और चित्र इस पेपर में शामिल हैं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animal | |||
| C57/B6J mice | Gempharmatech Experimental Animals Company | C57/B6J | For the establishment of pulp exposure |
| Equipment | |||
| 1 mL syringe | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instruments Co. LTD. | SB1-074(IV) | Apply in drug injection. |
| 8# C+ file | Readysteel | 0010047 | Apply in exposing the roof of pulp chamber. |
| Anesthesia Mix solution | 10% ketamine hydrochloride+ 5% xylazine + 85% sterile isotonic saline. | ||
| DAPI Staining Solution | Beyotime | C1005 | Apply in immunofluorescence staining for counter-staining of nucleus. |
| Dental high-speed dental handpiece | Jing yuan electronic commerce technology | WJ-422 | Apply in pulp exposure. |
| Heavy wire cutter | Jirui Medical Instrument Co., Ltd. | none | Apply inarc cutting. |
| Hematoxylin and Eosin Stain kit | Biosharp | BL700B | For the histological analysis of the slides. |
| IL-6 antibody | Novus | NBP2-89149 | Apply in immunofluorescence staining to detect the inflammation of the dental pulp. |
| Ketamine(Ketamine hydrochloride) | Vet One, Boise, Idaho, USA | C3N VT1 | 100mg/kg, IP. Apply in nesthetization. |
| Medical tap | 3M | 1530 | Apply in mice immobilization. |
| Orthodontic arch wire | Shanghai Wei Rong Medical Apparatus Co. LTD. | K417 | Diameter of 8µm |
| Round dental burr (0.6 mm) | Shofu global | 072208 | Apply in removing enamel and shallow layer of dentin. |
| Young loop bending plier | Jirui Medical Instrument Co., Ltd. | none | Apply in arc bending. |
References
- Kleinert, A., Kleinert, L., Ozimirska, M., Chałas, R. Endodontium - together or separately. Folia Morphol. 77 (3), 409-415 (2018).
- Dhillon, H., Kaushik, M., Sharma, R.
- Prati, C., Pirani, C., Zamparini, F., Gatto, M. R., Gandolfi, M. G. A 20-year historical prospective cohort study of root canal treatments. A Multilevel analysis. Int Endod J. 51 (9), 955-968 (2018).
- Su, Y., Wang, C., Ye, L. Healing rate and post-obturation pain of single- versus multiple-visit endodontic treatment for infected root canals: a systematic review. J Endod. 37 (2), 125-132 (2011).
- Murray, P. E., Garcia-Godoy, F., Hargreaves, K. M. Regenerative endodontics: a review of current status and a call for action. J Endod. 33 (4), 377-390 (2007).
- Arora, S., et al. Potential application of immunotherapy for modulation of pulp inflammation: opportunities for vital pulp treatment. Int Endod J. 54 (8), 1263-1274 (2021).
- Eramo, S., Natali, A., Pinna, R., Milia, E. Dental pulp regeneration via cell homing. Int Endod J. 51 (4), 405-419 (2018).
- Hasan, A., et al. Expression of Toll-like receptor 2, Dectin-1, and Osteopontin in murine model of pulpitis. Clin Oral Investig. 27 (3), 1177-1192 (2023).
- Wang, Y., et al. DDIT3 aggravates pulpitis by modulating M1 polarization through EGR1 in macrophages. Int Immunopharmacol. 120, 110328 (2023).
- Richert, R., et al. A critical analysis of research methods and experimental models to study pulpitis. Int Endod J. 55 (Suppl 1), 14-36 (2022).
- Huang, X. F., Zhao, Y. B., Zhang, F. M., Han, P. Y. Comparative study of gene expression during tooth eruption and orthodontic tooth movement in mice. Oral Dis. 15 (8), 573-579 (2009).
- Kwon, S. J., et al. Thermal irritation of teeth during dental treatment procedures. Restor Dent Endod. 38 (3), 105-112 (2013).
- He, Y., et al. Pulpal tissue inflammatory reactions after experimental pulpal exposure in mice. J Endod. 43 (1), 90-95 (2017).
- Karrar, R. N., et al. Molecular biomarkers for objective assessment of symptomatic pulpitis: A systematic review and meta-analysis. Int Endod J. 56 (10), 1160-1177 (2023).
- Goldman, E., Reich, E., Abramovitz, I., Klutstein, M.
- Duncan, H. F. Present status and future directions-Vital pulp treatment and pulp preservation strategies. Int Endod J. 55 (Suppl 3), 497-511 (2022).
- Shi, X., Li, Z., He, Y., Jiang, Q., Yang, X. Effect of different dental burs for experimental induction of pulpitis in mice. Arch Oral Biol. 83, 252-257 (2017).
- Du, W., et al. Indigenous microbiota protects development of medication-related osteonecrosis induced by periapical disease in mice. Int J Oral Sci. 14 (1), 16 (2022).
