L'imagerie non invasive des Homing leucocytes et des migrations In vivo</em
Summary
Ici, nous décrivons un non-invasive à deux photons approche microscopique (2P) pour l'étude des leucocytes homing dans le coussinet plantaire de la souris. Nous discutons des aspects techniques de notre préparation imagerie des tissus et de marcher le lecteur à travers une expérience typique de la configuration initiale à la collecte de l'exécution et des données.
Abstract
À deux photons (2P) est une technique de microscopie à haute résolution d'imagerie qui a été largement adaptée par les biologistes. La valeur de la microscopie 2P est qu'il fournit de riches informations sur les comportements spatio-temporelle des cellules dans les tissus intacts et dans des souris vivantes. Le recrutement des leucocytes jouent un rôle important dans la défense de l'hôte contre l'infection et quand incontrôlée, peut contribuer à des maladies inflammatoires et autoimmunes. Etudier le recrutement des leucocytes in vivo est un défi technique, car les cellules se déplacent rapidement dans les vaisseaux situés en profondeur dans les tissus diffusion de la lumière. À ce jour, la plupart des études d'imagerie intravitale nécessitent une préparation chirurgicale pour exposer les vaisseaux sanguins et des tissus. Pour éviter les dommages tissulaires et l'inflammation induite par la chirurgie elle-même, ici, nous décrivons une approche non invasive d'imagerie à cellule unique qui peut être utilisée pour étudier le trafic des leucocytes dans le coussinet plantaire de souris et des phalanges. Nous discutons des aspects techniques de notre préparation imagerie 2P et marcher le lecteur à travers une expérience typique de la configuration initiale à la collecte de l'exécution et des données.
Protocol
Discussion
Dans ce protocole vidéo nous montrent les procédures d'imagerie non-invasive 2P du recrutement des leucocytes en réponse à l'inflammation.
Le coussinet plantaire est un site classique pour l'étude de l'inflammation physiologiques telles que la maladie d'allergie, d'infection et auto-immunes 4-7. 2P imagerie fournit une image détaillée des étapes distinctes dans les voies de trafic de leucocytes, de laminage et d'adhérence dans les vaisseaux san…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par NIH R01-3155-53502 et de l'Université de Washington-Pfizer accord de recherche biomédicale.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane, USP | Butler Animal Health Supply | 029405 | ||
| 655nm non-targeted quantum dots | Invitrogen | Q21021MP | ||
| Tetramathylrhodamine conjugated E. coli BioParticles |
Invitrogen | E2862 | ||
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | |||
| Quick gel | Duro | |||
| Puralube Vet Ointment | Pharmaderm Animal Health | |||
| Insulin syringes | BD | 08290-3284-38 | ||
| PBS | Thermo Scirntific | SH30256.02 |
References
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