De imagen no invasivas de Homing leucocitos y Migración In vivo</em
Summary
Aquí se describe una manera no invasiva de dos fotones (2P), microscopía de enfoque para el estudio de leucocitos de recalada en la almohadilla plantar del ratón. Se discuten los aspectos técnicos de la preparación de imágenes de tejidos y caminar al lector a través de un experimento típico de la configuración inicial a la colección de ejecución y los datos.
Abstract
De dos fotones (2P), la microscopía es una técnica de imágenes de alta resolución que ha sido ampliamente adaptados por los biólogos. El valor de la microscopía de 2P es que proporciona una rica información espacio-temporal en relación con las conductas de células en los tejidos intactos y en ratones vivos. El reclutamiento de leucocitos juega un papel importante en la defensa del huésped contra la infección y cuando no se controla, puede contribuir a enfermedades inflamatorias y autoinmunes. Estudiar el reclutamiento de leucocitos en vivo es técnicamente difícil ya que las células se mueven rápidamente dentro de los vasos situados en lo profundo de los tejidos dispersión de la luz. Hasta la fecha, la mayoría de los estudios de imagen intravital requieren una preparación quirúrgica para exponer los vasos sanguíneos y los tejidos. Para evitar el daño a los tejidos y la inflamación inducida por la cirugía en sí, aquí, se describe una manera no invasiva de una sola célula enfoque de imágenes que se pueden utilizar para estudiar el tráfico de leucocitos en la almohadilla plantar del ratón y las falanges. Se discuten los aspectos técnicos de la preparación de imágenes 2P y caminar al lector a través de un experimento típico de la configuración inicial a la colección de ejecución y los datos.
Protocol
Discussion
En este protocolo de vídeo que muestran los procedimientos para obtener imágenes de 2P no invasiva de reclutamiento de leucocitos en respuesta a la inflamación.
La pata es un sitio clásico fisiológicas para el estudio de la inflamación, tales como la enfermedad de la alergia, infección y enfermedades autoinmunes 4-7. 2P imagen proporciona una imagen detallada de los distintos pasos en las vías de tráfico de leucocitos, de rodamiento y adhesión en los vasos sanguíneos de…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por el NIH subvención R01-3155-53502 y la Universidad de Washington-Pfizer Acuerdo de Investigación Biomédica.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane, USP | Butler Animal Health Supply | 029405 | ||
| 655nm non-targeted quantum dots | Invitrogen | Q21021MP | ||
| Tetramathylrhodamine conjugated E. coli BioParticles |
Invitrogen | E2862 | ||
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | |||
| Quick gel | Duro | |||
| Puralube Vet Ointment | Pharmaderm Animal Health | |||
| Insulin syringes | BD | 08290-3284-38 | ||
| PBS | Thermo Scirntific | SH30256.02 |
References
- Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages. Blood. 96, 719-726 (2000).
- Zinselmeyer, B. H., Lynch, J. N., Zhang, X., Aoshi, T., Miller, M. J. Video-rate two-photon imaging of mouse footpad – a promising model for studying leukocyte recruitment dynamics during inflammation. Inflamm Res. 57, 93-96 (2008).
- Zinselmeyer, B. H., Dempster, J., Wokosin, D. L., Cannon, J. J., Pless, R., Parker, I., Miller, M. J. Chapter 16. Two-photon microscopy and multidimensional analysis of cell dynamics. Methods Enzymol. 461, 349-378 (2009).
- Gray, D. F., Jennings, P. A. Allergy in experimental mouse tuberculosis. Am Rev Tuberc. 72, 171-195 (1955).
- Lin, A., Loughman, J. A., Zinselmeyer, B. H., Miller, M. J., Caparon, M. G. Streptolysin S inhibits neutrophil recruitment during the early stages of Streptococcus pyogenes infection. Infect Immun. 77, 5190-5201 (2009).
- Smith, C. J., Zhang, Y., Koboldt, C. M., Muhammad, J., Zweifel, B. S., Shaffer, A., Talley, J. J., Masferrer, J. L., Seibert, K., Isakson, P. C. Pharmacological analysis of cyclooxygenase-1 in inflammation. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13313-13318 (1998).
- Wipke, B. T., Allen, P. M. Essential role of neutrophils in the initiation and progression of a murine model of rheumatoid arthritis. J Immunol. 167, 1601-1608 (2001).
- Baez, S. An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy. Microvasc Res. 5, 384-394 (1973).
- Mempel, T. R., Scimone, M. L., Mora, J. R., von Andrian, U. H. in vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues. Curr Opin Immunol. 16, 406-417 (2004).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 2604-2609 (2003).
