백혈구 호밍 및 마이 그 레이션의 비침습 영상 생체내에</em
Summary
여기, 우리는 마우스 노상 강도의 백혈구가 추적 연구 비침습 두 개의 광자 (2P) 현미경의 접근 방식을 설명합니다. 우리는 조직 이미징 준비의 기술적 측면을 논의하고 실행 및 데이터를 수집하도록 설정 초기의 전형적인 실험을 통해 독자를 걸어보세요.
Abstract
두 광자 (2P) 현미경은 생물학에 의해 광범위하게 적응되어 고해상도 이미징 기술이다. 2P 현미경의 가치는 그대로 조직 내에서 라이브 생쥐의 세포 행동에 관한 풍부한 spatiotemporal 정보를 제공한다는 것입니다. 백혈구 모집 호스트 감염에 대한 방어와시 선택하지에 큰 역할을, 염증 및 면역 질환에 기여하실 수 있습니다. 세포가 빛을 산란 조직 내에 깊이있는 혈관 내에 빠르게 이동되므로 생체내에서 백혈구 채용을 공부하는 것은 기술적으로 도전합니다. 지금까지 대부분의 intravital 영상 연구는 혈관과 조직을 노출 외과 준비가 필요합니다. 수술 자체 유도 조직 손상과 염증을 방지하려면 여기, 우리는 마우스 노상 강도 및 지골에서 백혈구 거래를 연구하는 데 사용할 수있는 비침습 단일 세포 이미징 방법을 설명합니다. 우리는 2P 이미징 준비의 기술적 측면을 논의하고 실행 및 데이터를 수집하도록 설정 초기의 전형적인 실험을 통해 독자를 걸어보세요.
Protocol
Discussion
이 비디오 프로토콜에서 우리는 염증에 대한 응답으로 백혈구 모집의 비침습 2P 이미징을위한 절차를 보여줍니다.
노상 강도는 알레르기, 감염 및 면역 질환 4-7로 염증을 공부에 대한 고전적인 생리적 사이트입니다. 2P 영상은 압연 및 이펙터 기능의 사이트에 chemotaxis하는 혈관에 접착에서 백혈구 매매 경로의 별개의 단계에 대한 자세한 그림을 제공합니다. 우리는 ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 NIH 그랜트 R01 – 3155-53502 워싱턴 대학 화이자 바이오 메디컬 연구 계약에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane, USP | Butler Animal Health Supply | 029405 | ||
| 655nm non-targeted quantum dots | Invitrogen | Q21021MP | ||
| Tetramathylrhodamine conjugated E. coli BioParticles |
Invitrogen | E2862 | ||
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | |||
| Quick gel | Duro | |||
| Puralube Vet Ointment | Pharmaderm Animal Health | |||
| Insulin syringes | BD | 08290-3284-38 | ||
| PBS | Thermo Scirntific | SH30256.02 |
References
- Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages. Blood. 96, 719-726 (2000).
- Zinselmeyer, B. H., Lynch, J. N., Zhang, X., Aoshi, T., Miller, M. J. Video-rate two-photon imaging of mouse footpad – a promising model for studying leukocyte recruitment dynamics during inflammation. Inflamm Res. 57, 93-96 (2008).
- Zinselmeyer, B. H., Dempster, J., Wokosin, D. L., Cannon, J. J., Pless, R., Parker, I., Miller, M. J. Chapter 16. Two-photon microscopy and multidimensional analysis of cell dynamics. Methods Enzymol. 461, 349-378 (2009).
- Gray, D. F., Jennings, P. A. Allergy in experimental mouse tuberculosis. Am Rev Tuberc. 72, 171-195 (1955).
- Lin, A., Loughman, J. A., Zinselmeyer, B. H., Miller, M. J., Caparon, M. G. Streptolysin S inhibits neutrophil recruitment during the early stages of Streptococcus pyogenes infection. Infect Immun. 77, 5190-5201 (2009).
- Smith, C. J., Zhang, Y., Koboldt, C. M., Muhammad, J., Zweifel, B. S., Shaffer, A., Talley, J. J., Masferrer, J. L., Seibert, K., Isakson, P. C. Pharmacological analysis of cyclooxygenase-1 in inflammation. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13313-13318 (1998).
- Wipke, B. T., Allen, P. M. Essential role of neutrophils in the initiation and progression of a murine model of rheumatoid arthritis. J Immunol. 167, 1601-1608 (2001).
- Baez, S. An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy. Microvasc Res. 5, 384-394 (1973).
- Mempel, T. R., Scimone, M. L., Mora, J. R., von Andrian, U. H. in vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues. Curr Opin Immunol. 16, 406-417 (2004).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 2604-2609 (2003).
