Nicht-invasive Bildgebung von Leukozyten Homing und Migration In vivo</em
Summary
Hier beschreiben wir eine nicht-invasive Zwei-Photonen (2P)-Mikroskopie Ansatz zur Untersuchung Leukozyten homing in der Maus Fußballen. Wir besprechen die technischen Aspekte unserer Tissue Imaging Vorbereitung und gehen den Leser durch ein typisches Experiment von der ersten bis zur Ausführung und Datensammlung eingestellt.
Abstract
Zwei-Photonen (2P)-Mikroskopie ist eine hochauflösende bildgebende Verfahren, die im Großen und Ganzen wurde von Biologen angepasst. Der Wert der 2P-Mikroskopie ist, dass es reiche raumzeitlichen Informationen über Zell Verhaltensweisen innerhalb intakte Gewebe und in lebenden Mäusen liefert. Rekrutierung von Leukozyten spielt eine bedeutende Rolle in Immunabwehr gegen Infektionen und wenn deaktiviert, kann zu entzündlichen und Autoimmun-Erkrankungen beitragen. Studieren Leukozytenrekrutierung in vivo ist technisch anspruchsvoll, da die Zellen schneller sind, die innerhalb Schiffe tief im Lichtstreuung Gewebe entfernt. Bis heute verlangen die meisten intravital bildgebende chirurgische Vorbereitung auf die Blutgefäße und Gewebe freizulegen. Um zu vermeiden, die Gewebeschäden und Entzündungen, die durch Operation selbst induziert, hier beschreiben wir eine nicht-invasive Single-Cell-Imaging-Ansatz, mit dem Leukozyten-Handel mit der Maus Fußballen und Phalangen Studie werden können. Wir besprechen die technischen Aspekte unserer 2P Bildgebung Vorbereitung und gehen den Leser durch ein typisches Experiment von der ersten bis zur Ausführung und Datensammlung eingestellt.
Protocol
Discussion
In diesem Video zeigen wir, Protokoll der Verfahren für nicht-invasive Bildgebung von 2P Leukozytenrekrutierung in Reaktion auf Entzündungen.
Die Fußsohle ist ein klassisches physiologischen Ort für das Studium Entzündungen wie Allergien, Infektionen und Autoimmunerkrankungen 4-7. 2P Bildgebung liefert ein detailliertes Bild über verschiedene Schritte in Leukozyten Menschenhandel Wege, von Walz-und Haftung in den Blutgefäßen die Chemotaxis zu den Orten der Effektor-Funktio…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde vom NIH R01-3155 bis 53.502 und Washington University-Pfizer Biomedical Research Agreement unterstützt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane, USP | Butler Animal Health Supply | 029405 | ||
| 655nm non-targeted quantum dots | Invitrogen | Q21021MP | ||
| Tetramathylrhodamine conjugated E. coli BioParticles |
Invitrogen | E2862 | ||
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | |||
| Quick gel | Duro | |||
| Puralube Vet Ointment | Pharmaderm Animal Health | |||
| Insulin syringes | BD | 08290-3284-38 | ||
| PBS | Thermo Scirntific | SH30256.02 |
References
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