לא פולשני הדמיה של ביות ליקוציט והגירה In vivo</em
Summary
כאן אנו מתארים פולשני שני הפוטונים (2P) הגישה מיקרוסקופיה ללמוד ליקוציט ביות ב שודד את העכבר. אנו דנים בהיבטים הטכניים של ההכנה שלנו רקמות הדמיה ללכת את הקורא דרך בניסוי אופייני הראשונית להגדיר לאוסף ביצוע ונתונים.
Abstract
שני הפוטונים (2P) מיקרוסקופיה היא הדמיה ברזולוציה גבוהה טכניקה הותאם באופן רחב על ידי ביולוגים. הערך של מיקרוסקופיה 2P היא שזה מספק מידע עשיר spatiotemporal לגבי התנהגויות בתוך רקמות תאים שלמים של עכברים חיים. גיוס ליקוציט משחק תפקיד משמעותי בהגנה מפני זיהומים מארח וכאשר מסומנת, יכול לתרום מחלות דלקתיות אוטואימוניות. לימוד גיוס לויקוציטים in vivo מבחינה טכנית מאתגרת מאז התאים עוברים במהירות בתוך כלי הנמצא עמוק בתוך רקמות פיזור אור. עד כה, מחקרי הדמיה intravital ביותר דורשים הכנה כירורגי כדי לחשוף את כלי הדם והרקמות. כדי למנוע נזק לרקמות ודלקת הנגרמת על ידי הניתוח עצמו, כאן, אנחנו מתארים פולשני תא בודד הדמיה הגישה כי ניתן להשתמש כדי ללמוד סחר ליקוציט ב שודד את העכבר הפלנגות. אנו דנים בהיבטים הטכניים של ההכנה שלנו 2P הדמיה ללכת את הקורא דרך בניסוי אופייני הראשונית להגדיר לאוסף ביצוע ונתונים.
Protocol
Discussion
בפרוטוקול הווידאו הזאת אנחנו מדגימים את ההליכים עבור הדמיה בלתי פולשנית 2P גיוס לויקוציטים בתגובה לדלקת.
שודד הוא אתר קלאסי פיזיולוגיים לחקר דלקת כגון מחלה, אלרגיה דלקת אוטואימונית 4-7. 2P הדמיה מספק תמונה מפורטת של צעדים ברו?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענק R01-3155-53502 ו-אוניברסיטת וושינגטון פייזר הסכם Biomedical Research.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane, USP | Butler Animal Health Supply | 029405 | ||
| 655nm non-targeted quantum dots | Invitrogen | Q21021MP | ||
| Tetramathylrhodamine conjugated E. coli BioParticles |
Invitrogen | E2862 | ||
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | |||
| Quick gel | Duro | |||
| Puralube Vet Ointment | Pharmaderm Animal Health | |||
| Insulin syringes | BD | 08290-3284-38 | ||
| PBS | Thermo Scirntific | SH30256.02 |
References
- Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages. Blood. 96, 719-726 (2000).
- Zinselmeyer, B. H., Lynch, J. N., Zhang, X., Aoshi, T., Miller, M. J. Video-rate two-photon imaging of mouse footpad – a promising model for studying leukocyte recruitment dynamics during inflammation. Inflamm Res. 57, 93-96 (2008).
- Zinselmeyer, B. H., Dempster, J., Wokosin, D. L., Cannon, J. J., Pless, R., Parker, I., Miller, M. J. Chapter 16. Two-photon microscopy and multidimensional analysis of cell dynamics. Methods Enzymol. 461, 349-378 (2009).
- Gray, D. F., Jennings, P. A. Allergy in experimental mouse tuberculosis. Am Rev Tuberc. 72, 171-195 (1955).
- Lin, A., Loughman, J. A., Zinselmeyer, B. H., Miller, M. J., Caparon, M. G. Streptolysin S inhibits neutrophil recruitment during the early stages of Streptococcus pyogenes infection. Infect Immun. 77, 5190-5201 (2009).
- Smith, C. J., Zhang, Y., Koboldt, C. M., Muhammad, J., Zweifel, B. S., Shaffer, A., Talley, J. J., Masferrer, J. L., Seibert, K., Isakson, P. C. Pharmacological analysis of cyclooxygenase-1 in inflammation. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13313-13318 (1998).
- Wipke, B. T., Allen, P. M. Essential role of neutrophils in the initiation and progression of a murine model of rheumatoid arthritis. J Immunol. 167, 1601-1608 (2001).
- Baez, S. An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy. Microvasc Res. 5, 384-394 (1973).
- Mempel, T. R., Scimone, M. L., Mora, J. R., von Andrian, U. H. in vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues. Curr Opin Immunol. 16, 406-417 (2004).
- Miller, M. J., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 2604-2609 (2003).
