Summary
Experimentele auto-immuun encefalomyelitis (EAE) is een diermodel van multiple sclerose (MS), dat met de menselijke ziekte een robuuste humorale auto-immuunrespons deelt. Hier rapporteren we een eenvoudig en flexibel ELISA-protocol om auto-antilichamen in het serum van EAE-geïmmuniseerde muizen te kwantificeren.
Abstract
Experimentele auto-immuun encefalomyelitis (EAE) is een ziektemodel dat de auto-immuunziekte multiple sclerose (MS) op histopathologisch en moleculair niveau recapituleert. EAE wordt geïnduceerd door het immuniseren van proefdieren via subcutane injectie van korte myelinepeptiden samen met specifieke adjuvantia om de immuunrespons te versterken. Net als de menselijke tegenhanger ontwikkelen EAE-muizen demyeliniserende laesies, infiltratie van immuuncellen in het centrale zenuwstelsel (CZS), glia-activering en neuronaal letsel. Een consistente hoeveelheid bewijs ondersteunt ook een mechanistische rol voor B-celdisfunctie in de etiologie van zowel MS als EAE. B-cellen kunnen dienen als antigeenpresenterende cellen en als een primaire bron van pro-inflammatoire cytokines en auto-antilichamen. Bij EAE worden antilichamen gegenereerd tegen de myelinepeptiden die werden gebruikt om de ziekte te induceren. Van dergelijke auto-antilichamen is aangetoond dat ze ofwel myelineverlies ofwel pathogene reactivering van T-cellen in het CZS mediëren. Dit artikel beschrijft een efficiënt op ELISA gebaseerd protocol om auto-antilichamen te kwantificeren in het serum van C57BL/6J-muizen die zijn geïmmuniseerd met het myeline-oligodendrocytglycoproteïne 35-55 (MOG35-55) peptide. De voorgestelde methode dient als een krachtig hulpmiddel om de specificiteit en omvang van de afwijkende humorale respons in de context van auto-immuundemyelinisatie te onderzoeken.
Introduction
Multiple sclerose (MS) is een chronische auto-immuunziekte van het centrale zenuwstelsel (CZS) die wordt gekenmerkt door focale infiltratie van immuuncellen in het hersenparenchym, afbraak van myelineschulzen die axonen omhullen, glia-activering en neuronaal verlies1. Naast de gevestigde rol van pathogene T-cellen, hebben meerdere bewijslijnen de betrokkenheid van B-cellen bij het mediëren van de auto-immuunrespons tegen het CZS benadrukt. B-cellen ondergaan klonale expansie in de MS-hersenen en antilichamen tegen myelinecomponenten zijn gedetecteerd in demyelinistische laesies 2,3. De selectieve activering van perifere B-cellen bij het begin van de ziekte is onlangs gedocumenteerd, wat suggereert dat dit immuuncelcompartiment ook een vermeende rol speelt bij het ontstaan van de ziekte4. Het succes van B-cel-afbrekende therapieën zoals anti-CD20 monoklonale antilichamen bevestigt verder het mechanistische verband tussen afwijkende B-celwerking en auto-immuundemyelinisatie 5,6. Vanuit moleculair oogpunt kunnen B-cellen bijdragen aan ziekte via auto-antigeenpresentatie, pro-inflammatoire cytokinesecretie en autoreactieve productie van antilichamen.
Er zijn meerdere diermodellen ontwikkeld om specifieke kenmerken van het complexe MS-fenotype te recapituleren. Onder hen is experimentele auto-immuunencefalomyelitis (EAE) het meest gebruikte in vivo paradigma en berust op de immunisatie van proefdieren met korte peptiden afgeleid van myeline-eiwitten zoals myeline-oligodendrocytglycoproteïne (MOG) en myeline-basisch eiwit (MBP)7. EAE-geïmmuniseerde dieren ontwikkelen een demyeliniserende pathologie die in veel opzichten op MS lijkt, waaronder een robuuste humorale respons tegen het encefalitogene peptide8. Om deze reden hebben EAE-studies een belangrijke rol gespeeld bij het ontleden van de functie van B-cellen en auto-antilichamen in de context van ziekte. Zo werd bijvoorbeeld aangetoond dat MOG-specifieke antilichamen geïsoleerd uit MS-patiënten het klinische beloop kunnen verergeren in EAE-modellen9. Met name het prolineresidu op positie 42 in menselijke MOG bleek cruciaal te zijn voor het bepalen van de pathogeniteit van auto-antilichamen10. Meer recentelijk is gebleken dat MOG-specifieke auto-antilichamen de ziekte bevorderen, niet alleen door myelineverlies te mediëren, maar ook door de reactivering van autoreactieve T-cellen in het CZSte stimuleren 11.
Gezien het belang van antilichaamresponsen bij auto-immuniteit van het CZS, presenteert dit artikel een op ELISA gebaseerd protocol om de serumspiegels van autoreactieve antilichamen efficiënt te meten bij C57BL/6J-muizen EAE geïmmuniseerd met MOG35-55-peptide. In het eerste deel van het protocol wordt de methode beschreven om serum af te nemen via een intracardiale punctie. Vervolgens zullen de procedures voor het opzetten van de ELISA-test en het verkrijgen van de gegevens in detail worden beschreven. Tot slot komt de data-analyse en -interpretatie aan bod.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedures waarbij muizen betrokken waren, werden uitgevoerd in overeenstemming met de experimentele richtlijnen die zijn goedgekeurd door de East Carolina University Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). In deze studie werden wildtype C57BL/6J vrouwelijke muizen tussen 8-10 weken oud gebruikt. De dieren zijn afkomstig van een commerciële bron (zie Materiaaltabel). EAE werd geïnduceerd naar aanleiding van eerder gepubliceerde rapporten 12,13,14.
1. Serum collectie
- Euthanaseer de experimentele muis door CO2 -verstikking of een overdosis isofluraan op het vereiste tijdstip (volgens institutioneel goedgekeurde protocollen) na het induceren van EAE via MOG35-55-immunisatie.
OPMERKING: Het totale aantal muizen en tijdstippen voor serumafname kan variëren afhankelijk van het specifieke experiment. - Nadat de afwezigheid van vitale functies is bevestigd door teen- of staartknijpen, plaatst u de muis in een dorsale ligpositie op een dissectiebak en bevestigt u de ledematen op hun plaats met spelden of tape. Richt het muislichaam op de LED-lichtbron (zie Materiaaltabel) om de borstkas van het dier te verlichten.
- Spuit de muizenvacht in met 70% ethanol en maak een incisie in de middellijn van 3-4 cm langs de buik van het bekken tot de xiphoid met behulp van de dissectorschaar, waarbij u ervoor zorgt dat u geen organen en grote bloedvaten tegenkomt (Figuur 1A-C). Om de procedure te vergemakkelijken, gebruikt u de pincet om de huid over het xiphoid-proces vast te pakken.
- Snijd het middenrif zijdelings door en knip vervolgens de ribbenkast aan beide zijkanten naar voren af met behulp van de veerschaar, stop voordat u het borstbeen bij de middellijn bereikt (Figuur 1D). Vouw de ribflap die is gemaakt over het hoofd van de muis om het hart bloot te leggen (Figuur 1E).
OPMERKING: Het doorsnijden van het borstbeen moet worden vermeden, omdat dit de belangrijkste thoracale slagaders die naast het bot liggen zal beschadigen en het bloedvolume dat kan worden verzameld zal verminderen. - Steek een naald van 25 G die is aangesloten op een spuit van 1 ml in de linkerventrikel en verzamel het bloed door de zuiger voorzichtig terug te trekken (Figuur 1F). Om de naaldpunctie te vergemakkelijken, zet u het hart voorzichtig vast tegen een pincet.
OPMERKING: Als het bloed niet onmiddellijk in de spuit verschijnt, moet de naald langzaam worden gedraaid en moet een andere hoek worden getest. Er moeten echter inspanningen worden geleverd om de naald bij de eerste poging goed te plaatsen om te voorkomen dat er onnodige gaten in het hart ontstaan waar bloed uit kan lekken. - Breng het bloed over in een steriel buisje van 1,5 ml en laat het 30 minuten stollen bij kamertemperatuur. Verwijder het stolsel door centrifugeren bij 2000 × g gedurende 20 minuten bij 4 °C. Verzamel het supernatant, dat de serumfractie vertegenwoordigt, en bewaar aliquots voor eenmalig gebruik in cryogene buizen bij -80 °C voor toekomstige tests.
2. ELISA-test
- Resuspendeer het gevriesdroogde MOG35-55-peptide (zie materiaaltabel) in water om een voorraad van 10 mg/ml te verkrijgen. Voordat u met het experiment begint, verdunt u de bouillon tot 10 μg/ml in een coatingbuffer (zie materiaaltabel) en pipetteert u 100 μl/putje van de uiteindelijke oplossing tot een plaat met 96 putjes. Sluit de plaat af met een zelfklevende folie om verdamping te voorkomen en laat de plaat een nacht bij 4 °C incuberen.
OPMERKING: Voor elk monster moeten ten minste 2 putjes worden berekend en er moeten ook 2 extra putjes worden opgenomen voor een blanco controle. - Smeer tegelijkertijd hetzelfde aantal putjes in met 100 μl/putje runderserumalbumine (BSA) opgelost in coatingbuffer in een concentratie van 10 μg/ml. Deze extra putten zullen dienen als achtergrondcontroles.
OPMERKING: Het wordt aanbevolen om de controleputten met BSA te coaten, aangezien de coating- en blokkeerbuffers verschillende samenstellingen hebben. Houd er rekening mee dat andere encefalitogene peptiden (zoals PLP139-151 of MBP84-104) kunnen worden gebruikt als irrelevante antigenen als alternatief voor BSA. - Was de dag erna de plaat 3 keer met 200 μL/putje fosfaatbufferzoutoplossing aangevuld met 0,05% Tween 20 (PBS-T). Voeg vervolgens 100 μL/putje van een blokkeringsoplossing van 3% BSA in PBS (zonder Tween 20) toe en incubeer de plaat die gedurende 1 uur bij 37 °C is afgesloten in een hybridisatieoven.
- Was de plaat 3 keer met 200 μL/putje PBS-T. Verdun elk serummonster 1:100 in een blokoplossing en voeg 100 μl/putje toe aan zowel MOG35-55 als BSA-gecoate putjes. Voeg dezelfde hoeveelheid blokkerende oplossing toe aan de putjes die als blanco's zijn aangeduid. Incubeer de plaat verzegeld gedurende 2 uur bij kamertemperatuur, met constant schudden (250 tpm).
- Was de plaat 3 keer met 200 μL/putje PBS-T. Verdun het HRP-geconjugeerde secundaire antilichaam (1:2000, zie materiaaltabel) in een oplossing gemaakt van 0,2% BSA in PBS-T en voeg 100 μl/putje toe aan alle putjes. Incubeer de plaat verzegeld gedurende 1 uur bij kamertemperatuur, met constant schudden (250 tpm).
- Was de plaat 3 keer met 200 μL/putje PBS-T. Voeg 100 μL/putje 3,3',5,5' tetramethylbenzidine (TMB) substraat (zie materiaaltabel) toe aan alle putjes en incubeer 1-5 minuten in het donker, waarbij de ontwikkeling van een blauwe kleur wordt gecontroleerd.
- Stop de reactie door 100 μL/putje stopoplossing toe te voegen (zie Materiaaltabel) en meet de optische dichtheid (OD) in elk putje met behulp van een plaatlezer die is ingesteld op een golflengte van 450 nm.
OPMERKING: Het TMB-substraat moet 30-60 minuten bij kamertemperatuur in evenwicht worden gebracht voordat het aan de putjes wordt toegevoegd.
- Stop de reactie door 100 μL/putje stopoplossing toe te voegen (zie Materiaaltabel) en meet de optische dichtheid (OD) in elk putje met behulp van een plaatlezer die is ingesteld op een golflengte van 450 nm.
3. Analyse van de gegevens
- Vul een Excel-spreadsheet met de OD-waarden die van de plaat worden gelezen. Gemiddeld het gemiddelde van de OD-waarden verkregen uit dubbele putjes (zowel MOG35-55 als BSA-gecoat) voor elk monster.
- Trek voor elk monster de gemiddelde waarde van de BSA-gecoate putjes af van die van MOG35-55 gecoate putjes. De resulterende achtergrondgecorrigeerde waarden zullen evenredig zijn met de concentratie van anti-MOG35-55-antilichamen in de verschillende serummonsters.
OPMERKING: Lege putjes zouden moeten resulteren in gecorrigeerde waarden rond 0. - Pas een niet-parametrische statistische test toe, zoals de Mann-Whitney U-test, om de gemiddelde OD-waarden tussen twee experimentele omstandigheden te vergelijken. Voeg ten minste 3 onafhankelijke monsters toe voor elke aandoening.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Om de robuustheid van de huidige ELISA-test aan te tonen, werd de methode getest op serummonsters geïsoleerd uit een cohort van C57BL/6J vrouwelijke muizen 20 dagen na immunisatie (dpi) met 100 μg MOG35-55-peptide in volledig Freund's adjuvans (CFA) volgens een gevalideerd EAE-inductieprotocol 12,13,14. De dieren kregen ook 400 ng kinkhoesttoxine op dag 0 en 2. Serummonsters van nep-geïmmuniseerde dieren met alles behalve zonder het peptide dienden als negatieve controles. Alle EAE-muizen ontwikkelden de eerste tekenen van ziekte tussen 11-14 dpi en bereikten bij 20 dpi een gemiddelde score van 2,6 ± 0,6 (standaardfout, SE) op een schaal van 0-6 (0, geen tekenen; 1, verminderde staarttonus; 2, milde monoparese of paraparese; 3, ernstige paraparese; 4, dwarslaesie; 5, quadriparese; en 6, stervende of dood)12. Zoals verwacht vertoonden de EAE-monsters significant hogere OD-waarden in vergelijking met controlemonsters (Figuur 2). Deze gegevens bevestigen de aanwezigheid van een robuuste IgG-immunoglobulinerespons tegen het MOG-peptide op het hoogtepunt van de ziekte.
Figuur 1: Hartpunctieprocedure. (A-E) Representatieve beelden van de thoracotomieprocedure om toegang te krijgen tot het hart bij volwassen muizen. (F) Representatief beeld van de juiste procedure voor het inbrengen van de naald in de linker ventrikel van het muizenhart. Relevante anatomische structuren worden in elk paneel aangegeven om de dissectie te vergemakkelijken. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: MOG peptide auto-antilichaam ELISA. Serumspiegels van anti-MOG35-55 IgG-immunoglobulinen werden getest in EAE en nep-geïmmuniseerde muizen 20 dagen na immunisatie (dpi) met behulp van het gerapporteerde ELISA-protocol. Consistent hogere OD-waarden werden gedetecteerd in EAE-monsters in vergelijking met controles. De gegevens worden gepresenteerd als gemiddelden ± SE (N = 3 per groep). Verschillen tussen groepen werden beoordeeld door middel van eenzijdige Mann-Whitney U-test, *P ≤ 0,05. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hier werd een eenvoudig en efficiënt op ELISA gebaseerd protocol gerapporteerd om de humorale respons nauwkeurig te kwantificeren in een relevant diermodel van MS-pathologie. Deze methode is onlangs gebruikt om de nieuwe rol van het ataxine-1-eiwit te beschrijven bij het beheersen van de serumspiegels van auto-antilichamen in het MOG35-55/C57BL6J EAE-paradigma12. In dit opzicht moet met een aantal factoren rekening worden gehouden om consistente en biologisch zinvolle resultaten met deze methode te verkrijgen.
Ten eerste is het van cruciaal belang om serummonsters van hoge kwaliteit te verzamelen en hemolyse te voorkomen. Hemoglobine en andere intracellulaire componenten die vrijkomen uit rode bloedcellen in zwaar gehemolyseerde monsters kunnen interfereren met de antigeen-antilichaamreactie en relatieve kleurmeting in de ELISA-test. Om hemolyse te voorkomen, verdient het de voorkeur om hoge negatieve druk in de spuit tijdens bloedafname te vermijden, omdat hierdoor erytrocyten kunnen scheuren.
Ten tweede is het belangrijk om de serummonsters te verdunnen om OD-waarden te verkrijgen binnen het lineaire deel van de absorptiecurve. Onze aanbevolen verdunningsfactor (1:100) werd gekalibreerd op de entiteit van de EAE-pathologie die in onze muizenstammen werd geïnduceerd. Gezien het intrinsieke niveau van heterogeniteit van dit in vivo model, wordt het ten zeerste aanbevolen om voorlopige titratie-experimenten uit te voeren om de ideale verdunningsfactor te identificeren voor de specifieke EAE-pathologie die wordt getest. Evenzo kunnen de incubatietijden met het TMB-substraat worden aangepast om de verzadiging van het chromogene signaal te voorkomen en de OD-waarden binnen het bereik van 0-2 te houden.
Ten derde zijn de gecorrigeerde OD-waarden die in dit protocol worden verkregen, compatibel met een semi-kwantitatieve analyse van auto-antilichaamserumtiters tussen verschillende experimentele omstandigheden of voor kinetische studies langs ziekteprogressie. Als een absolute kwantificering van de auto-antilichaamniveaus nodig is, moet een kalibratiecurve worden geïmplementeerd in het ELISA-ontwerp. Meerdere antilichamen tegen MOG-peptide zijn in de handel verkrijgbaar en kunnen worden gebruikt als betrouwbare standaarden om de concentratie van MOG-specifieke antilichamen in het serum van EAE-muizen te berekenen. Om effecten van verschillende grootte vast te leggen, wordt aanbevolen om een breed scala aan verdunningen voor het kalibrerende antilichaam op te nemen (variërend van pg/ml tot μg/ml-concentraties).
Ten slotte is dit protocol uiterst flexibel en kan het gemakkelijk worden aangepast aan verschillende onderzoeksbehoeften. Het gecoate encefalitogene peptide kan bijvoorbeeld worden gevarieerd om de auto-antilichaamrespons in andere EAE-paradigma's te beoordelen. Bovendien kunnen verschillende secundaire antilichamen worden gebruikt om de niveaus van verschillende immunoglobulineklassen te meten. Daartoe heeft dit protocol met succes aangetoond dat ataxine-1 zowel IgG- als IgM-klassen van MOG-peptidespecifieke antilichamen controleert12. Ten slotte zou een mogelijk gebruik kunnen worden overwogen voor het detecteren van auto-antilichamen in het bloed van MS-patiënten. Er bestaan echter substantiële verschillen tussen EAE- en MS-ziekten. Terwijl de eerste kunstmatig wordt geïnduceerd via het versterken van de immuunrespons tegen een goed gedefinieerd auto-antigeen met sterke adjuvantia, ontstaat de laatste spontaan en zijn er nog geen eenduidige auto-antigenen geïdentificeerd. Recent bewijs suggereert de mogelijke betrokkenheid van moleculaire nabootsing met virale eiwitten15. Daarom moeten kanttekeningen altijd in overweging worden genomen bij het direct vertalen van waarnemingen die in dit diermodel zijn verzameld naar de ziekte bij de mens.
Samenvattend vertegenwoordigt het huidige protocol een gemakkelijk en handig alternatief voor commerciële ELISA-kits en kan het efficiënt worden gecombineerd met andere methoden, zoals celgebaseerde assays (CBA's) voor de nauwkeurige schatting van de afgifte van auto-antilichamen in de context van auto-immuundemyelinisatie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs verklaren geen tegenstrijdige belangen.
Acknowledgments
Deze studie werd ondersteund door de National Institutes of Health (R03NS131908) en het ministerie van Defensie via het Multiple Sclerosis Research Program onder Award No. W81XWH-22-1-0517. Meningen, interpretaties, conclusies en aanbevelingen zijn die van de auteur en worden niet noodzakelijkerwijs onderschreven door het ministerie van Defensie. Deze studie werd ook ondersteund door startup-fondsen van de East Carolina University.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 mL syringes | BD Biosciences | 309628 | |
| 1.5 mL microcentrifuge tubes | Fisher | 05-408-129 | |
| 25 G needles | BD Biosciences | 305122 | |
| 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine (TMB) substrate | Thermo Fisher | N301 | Store at 4 °C |
| Adhesive seals | Thermo Fisher | AB0558 | |
| Bovine serum albumin (BSA) | Sigma | A7906 | Store at 4 °C |
| C57BL/6J female mice | The Jackson Laboratory | 000664 | Animals between 8-10 weeks of age should be used for EAE experiments |
| Cryogenic tubes | Fisher | 10-500-25 | |
| Dissection tray | Fisher | S111022 | |
| Dissector scissors | Fine Science Tools | 14082-09 | |
| ELISA coating buffer | BioLegend | 421701 | Store at 4°C |
| Excel software | Microsoft | Analysis spreadsheet | |
| Forceps | Fine Science Tools | 11152-10 | |
| Goat Anti-Mouse IgG, Human ads-HRP | SouthernBiotech | 1030-05 | Store at 4 °C |
| LED light source | Fisher | AMPSILED21 | |
| Microplate reader | Fisher | 14-377-575 | |
| Molecular biology grade water | Corning | 46-000-Cl | |
| Mouse MOG35-55 peptide | EZBiolab | cp7203 | Store at -80 °C |
| Multichannel pipette | Axygen | AP-12-200-P | |
| Noyes spring scissors | Fine Science Tools | 15011-12 | |
| Nunc MaxiSorp 96-well plates | BioLegend | 423501 | |
| Orbital shaker | Fisher | 88-861-023 | |
| Oven | VWR | 445-0024 | |
| Phosphate buffer saline (PBS) | Thermo Fisher | 14190144 | |
| Refrigerated tabletop centrifuge | Thermo Fisher | 75002441 | |
| Stop solution | Thermo Fisher | N600 | |
| Tween 20 | Bio-Rad | 1706531 |
References
- Reich, D. S., Lucchinetti, C. F., Calabresi, P. A.
- Baranzini, S. E., et al. B cell repertoire diversity and clonal expansion in multiple sclerosis brain lesions. J Immunol. 163 (9), 5133-5144 (1999).
- Genain, C. P., Cannella, B., Hauser, S. L., Raine, C. S. Identification of autoantibodies associated with myelin damage in multiple sclerosis. Nat Med. 5 (2), 170-175 (1999).
- Ma, Q., et al. Specific hypomethylation programs underpin b cell activation in early multiple sclerosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (51), e2111920118 (2021).
- Hauser, S. L., et al. Ocrelizumab versus interferon beta-1a in relapsing multiple sclerosis. N Engl J Med. 376 (3), 221-234 (2017).
- Montalban, X., et al. Ocrelizumab versus placebo in primary progressive multiple sclerosis. N Engl J Med. 376 (3), 209-220 (2017).
- Didonna, A. Preclinical models of multiple sclerosis: Advantages and limitations towards better therapies. Curr Med Chem. 23 (14), 1442-1459 (2016).
- Steinman, L., Zamvil, S. S. How to successfully apply animal studies in experimental allergic encephalomyelitis to research on multiple sclerosis. Ann Neurol. 60 (1), 12-21 (2006).
- Khare, P., et al. Myelin oligodendrocyte glycoprotein-specific antibodies from multiple sclerosis patients exacerbate disease in a humanized mouse model. J Autoimmun. 86, 104-115 (2018).
- Marta, C. B., Oliver, A. R., Sweet, R. A., Pfeiffer, S. E., Ruddle, N. H. Pathogenic myelin oligodendrocyte glycoprotein antibodies recognize glycosylated epitopes and perturb oligodendrocyte physiology. Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (39), 13992-13997 (2005).
- Flach, A. C., et al. Autoantibody-boosted t-cell reactivation in the target organ triggers manifestation of autoimmune cns disease. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (12), 3323-3328 (2016).
- Didonna, A., et al. Ataxin-1 regulates b cell function and the severity of autoimmune experimental encephalomyelitis. Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (38), 23742-23750 (2020).
- Didonna, A., et al. Sex-specific tau methylation patterns and synaptic transcriptional alterations are associated with neural vulnerability during chronic neuroinflammation. J Autoimmun. 101, 56-69 (2019).
- Ma, Q., Matsunaga, A., Ho, B., Oksenberg, J. R., Didonna, A. Oligodendrocyte-specific argonaute profiling identifies micrornas associated with experimental autoimmune encephalomyelitis. J Neuroinflammation. 17 (1), 297 (2020).
- Lanz, T. V., et al. Clonally expanded b cells in multiple sclerosis bind ebv ebna1 and glialcam. Nature. 603 (7900), 321-327 (2022).
