成人 ショウジョウバエ の注射:化合物または標識の送達方法

Abstract

出典:ナザリオ・ツール、A.E.、呉、L.P. フルーツフライの細胞性免疫応答を評価し、 ショウジョウバエメラノガスター、インビボファゴサイトーシスアッセイを使用して。 J. ヴィス・エクス (2019).

このビデオでは、生きた成体ハエの注入を行う方法を説明し、標識粒子とトリパンブルーをフライ腹部に注入して食細胞節をアッセイするプロトコルの例を示します。

Protocol

このプロトコルは、ナザリオ・ツールとウーからの抜粋であり、フルーツフライの細胞性免疫応答を評価し、ショウジョウバエメラノガスター、インビボファゴサイトシスアッセイを使用して、J.Vis.Exp.(2019)。 1. フッ素粒子の注射準備 市販の10mgの熱死菌粒子を、990μL無菌1x PBSおよび10μL50 mMのアジドナトリウムを添加して10mg/mLのストック濃度?…

Materials

5430-10 PicoNozzle Kit	World Precision Instruments	5430-10	Holder for 1.0mm pipette
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Fluorescein conjugate	Invitrogen	E2861	Killed E. coli labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~494/~518 nm)
Needle Pipette Puller	David Kopf Instruments	Model 725
Pneumatic PicoPump PV820	World Precision Instruments	SYS-PV820	The World Precision Instruments Pneumatic PicoPump PV820 uses differential pressures to hold liquid in the glass needle between injections. The user manually controls short bursts of gas pressure to expel the liquid – allowing delivery of sub-nanoliter volumes. The amount of liquid delivered depends on two main variables – the size of the glass needle opening and the amount of time injection pressure is applied. set the instrument to 100 ms "TIMED" mode.
Thin Wall Glass Capillaries	World Precision Instruments	TW100F-3	Needles for injection. OD = 1.0 mm
Trypan Blue Solution (0.4%)	Sigma	T8154	Used to quench extracellular fluorescence of Fluorescein, Alexa Fluor, or Texas Red labeled particles.