تصنيع مواد حقن المشتقة بيولوجيا للهندسة الأنسجة عضلة القلب
Summary
طرق لإعداد جيل من مصفوفة حقن الأنسجة decellularized وحقنه في الفئران عضلة القلب<em> في الجسم الحي</em> موصوفة.
Abstract
هذا البروتوكول يوفر أساليب للإعداد للحقن هلام خارج الخلية (ECM) مصفوفة لعضلة القلب تطبيقات هندسة الأنسجة. باختصار ، هو مجفد decellularized الأنسجة ، والمضروب ، إنزيمي هضمها ، وتقديمهم إلى درجة الحموضة ثم الفسيولوجية. وlyophilization يزيل كل محتوى الماء من الأنسجة ، مما أدى إلى ECM الجافة التي يمكن أن تكون الأرض إلى مسحوق ناعم مع طاحونة صغيرة. بعد الطحن ، يتم هضمها ومسحوق ECM مع البيبسين لتشكيل مصفوفة تعطى عن طريق الحقن. بعد تعديل درجة الحموضة 7.4 ، يمكن حقن مادة سائلة مصفوفة في عضلة القلب. وقد أظهرت نتائج فحوصات توصيف المواد الهلامية المصفوفة السابقة التي تنتج من نسيج عضلة القلب والتامور decellularized الاحتفاظ مكونات ECM الأصلية ، بما في ذلك البروتينات المختلفة ، والببتيدات الجليكوزامينوجليكان. نظرا لاستخدام هذه المواد للهندسة الأنسجة ، في توصيف فيفو يكون مفيدا بشكل خاص ، وهنا ، وهي طريقة لأداء حقنة جماعية في البطين الأيسر (LV) وتقدم مجانا الجدار كوسيلة لتحليل استجابة المضيف للهلام في مصفوفة نموذج حيوان صغير. وتمكنت من الوصول إلى تجويف الصدر من خلال الحجاب الحاجز ويتم حقن قليلا فوق قمة في الجدار الحر LV. يمكن للسقالة مشتقة بيولوجيا يمكن تصور وضع العلامات التي البيوتين قبل الحقن وتلوين ثم أقسام الأنسجة مع الفجل البيروكسيداز – مترافق neutravidin ووضع تصور عن طريق تلوين (DAB) diaminobenzidine. ويمكن أيضا تحليل للمنطقة الحقن يمكن القيام به مع تلوين النسيجية والمناعية. في هذه الطريقة ، وأظهرت دراسة سبق الهلام مصفوفة التامور وعضلة القلب لتشكيل ليفي ، وتعزيز شبكات مسامية تشكيل سفينة داخل منطقة الحقن.
Protocol
Discussion
هذا الأسلوب يسمح لجيل من السقالات ، والمستمدة من الناحية البيولوجية لهندسة الأنسجة حقن عضلة القلب. وقد وضعت في البداية على الرغم من هذه الطرق لصنع واختبار في الجسم الحي من هلام مصفوفة عضلة القلب وقدمت هنا مع هلام تأموري مصفوفة ، ويمكن تكييف هذا البروتوكول للاست?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا البحث في جزء من المعاهد الوطنية للصحة المدير الجديد المبتكر برنامج الجائزة ، وهو جزء من المعاهد الوطنية للصحة خارطة الطريق للبحوث الطبية ، من خلال عدد المنح – 1 – DP2 OD004309 – 01. SBS – N. أود أن أتوجه بالشكر إلى جبهة الخلاص الوطني للبحوث زمالة دراسات عليا.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Reagents: | ||||
| Pepsin | Sigma-Aldrich | p6887-1G | Lyophilized | |
| Biotin | Thermo Scientific | 21217 | ||
| Neutravidin-HRP | Thomas Scientific | 21130 | ||
| Equipment: | ||||
| Wiley Mini Mill | Thomas Scientific | 3383L10 | ||
| Labconco Lyophilizer | Labconco, Inc | 7670520 | ||
| Surgical supplies: | ||||
| Betadine | Purdue Products, L.P. | 67618-154-16 | ||
| Lactated Ringers Solution | MWI | 003966 | ||
| KY Jelly | MWI | 28658 | ||
| Lidocaine, 2% | MWI | 17767 | ||
| Buprenorphine hydrochloride | Reckitt Benckiser Healthcare (UK) Ltd. | 12496-0757-1 | ||
| Artificial tear ointment | Fisher | NC9860843 | ||
| Triple antibiotic ointment | Fisher | 19082795 | ||
| Isoflurane | MWI | 60307-120-25 | ||
| Otoscope | MWI | 008699 | ||
| Stop cock | MWI | 006245 | ||
| 3-0 Vicrile suture | MWI | J327H | ||
| 5-0 Proline suture | MWI | s-1173 | ||
| Reverse cutting (RC) needle | Ethicon | 8684G | ||
| Microhemostats | Fine Science Tools | 13013-14 | ||
| Rat tooth microforceps | Fine Science Tools | 11084-07 | ||
| No. 10 scalpel | Fine Science Tools | 10110-01 | ||
| Blunt scissors | Fine Science Tools | 14108-09 | ||
| Sharp, curved scissors | Fine Science Tools | 14085-08 | ||
| Large, serrated forceps | Fine Science Tools | 1106-12 | ||
| PE160 suction tubing | BD | 427430 | ||
| Clippers | MWI | 21608 | ||
| Skin staples/stapler | Ethicon | PRR35 | ||
| General supplies: | ||||
| Stir plates | ||||
| 0.1 M HCl | ||||
| 1 M NaOH | ||||
| 10x PBS | ||||
| 1x PBS | ||||
| 70% Ethanol | ||||
| 0.1 mL syringes | ||||
| 10 mL syringe | ||||
| Q-tips | ||||
| Surgical glue | ||||
| Surgical drape | ||||
| Towel clamps | ||||
| Small hand-held vacuum |
Referências
- Seif-Naraghi, S. B., Salvatore, M. A., Magoffin-Schup, P. J., Hu, D. P., Christman, K. L. Design and characterization of an injectable pericardial matrix gel: A potentially autologous scaffold for cardiac tissue engineering. Tissue Engineering. , (2009).
- Freytes, D. O., Martin, J., Velankar, S. S., Lee, A. S., Badylak, S. F. Preparation and rheological characterization of a gel form of the porcine urinary bladder matrix. Biomaterials. 29, 1630-1630 (2008).
- Gilbert, T. W., Sellaro, T. L., Badylak, S. F. Decellularization of tissues and organs. Biomaterials. 27, 3675-3675 (2006).
- Liao, J., Joyce, E. M., Sacks, M. S. Effects of decellularization on the mechanical and structural properties of the porcine aortic valve leaflet. Biomaterials. 29, 1065-1065 (2008).
- Singelyn, J. M., DeQuach, J. A., Seif-Naraghi, S. B., Littlefield, R. B., Schup-Magoffin, P. J., Christman, K. L. Naturally derived myocardial matrix as an injectable scaffold for cardiac tissue engineering. Biomaterials. 30, 5409-5409 (2009).
- Christman, K. L., Vardanian, A. J., Fang, Q., Sievers, R. E., Fok, H. H., Lee, R. J. Injectable fibrin scaffold improves cell transplant survival, reduces infarct expansion, and induces neovasculature formation in ischemic myocardium. J Am Coll Cardiol. 44, 654-654 (2004).
- Christman, K. L., Fok, H. H., Sievers, R. E., Fang, Q., Lee, R. J. Fibrin glue alone and skeletal myoblasts in a fibrin scaffold preserve cardiac function after myocardial infarction. Tissue Eng. 10, 403-410 (2004).
- Huang, N. F., Sievers, R. E., Park, J. S., Fang, Q., Li, S., Lee, R. J. A rodent model of myocardial infarction for testing the efficacy of cells and polymers for myocardial reconstruction. Nat Protoc. (1), 1596-1609 (2006).
- Ott, H. C., Matthiesen, T. S., Goh, S. K., Black, L. D., Kren, S. M., Netoff, T. I. Perfusion-decellularized matrix: using nature’s platform to engineer a bioartificial heart. Nat Med. 14, 213-221 (2008).
- Badylak, S. F. The extracellular matrix as a biologic scaffold material. Biomaterials. 28, 3587-3593 (2007).
