Производство биологически Производные инъекций Материалы для тканевой инженерии миокарда
Summary
Способы получения инъекционный гель матрицу из decellularized ткани и инъекционных его в крысу миокарда<em> В естественных условиях</em> Описаны.
Abstract
Этот протокол предоставляет методы для подготовки инъекционной внеклеточного матрикса (ECM), гель для инфаркта приложений тканевой инженерии. Короче говоря, decellularized ткани лиофилизированный, измельчают, ферментативно переваривается, а затем привел к физиологическим рН. Лиофилизации удаляет все содержание воды из тканей, в результате чего сухих ECM, которые могут быть земли в мелкий порошок с небольшим заводом. После фрезерования, порошок ECM переваривается пепсином в форме инъекционных матрицы. После корректировки рН 7,4, жидкий материал матрицы может быть введен в миокарде. Результаты предыдущих анализов характеристик показали, что матрица гели производятся из decellularized перикарда и ткани миокарда сохранить собственные компоненты ECM, включая разнообразные белки, пептиды и гликозаминогликанов. При использовании этого материала для тканевой инженерии, в естественных условиях характеристика особенно полезна, здесь метода для проведения очной инъекции в левого желудочка (ЛЖ) свободной стенки представлена как средство анализа принимающей ответ на матрице геля в маленькая модель животного. Доступ к грудной полости достигается через диафрагму и инъекция сделана чуть выше вершины в стене LV бесплатно. Биологически производных лесов могут быть визуализированы биотин-маркировки до инъекции, а затем окрашивание срезов ткани с пероксидазой хрена, конъюгированных neutravidin и визуализации с помощью диаминобензидина (DAB) окрашивания. Анализ области инъекции может быть сделано с гистологическим и иммуногистохимического окрашивания. Таким образом, ранее рассмотрены перикарда и инфаркта гели матрицы были показаны формы волокнистых, пористых сетей и способствовать образованию судно в области инъекции.
Protocol
Discussion
Этот метод позволяет поколение биологически получены, инъекционные лесов для инфаркта тканевой инженерии. Хотя эти методы были первоначально разработаны для изготовления и в естественных условиях тестирования инфаркт гель матрицы и представлена здесь с перикарда гель матри…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Работа выполнена при частичной поддержке Нового Новатор NIH директора премии программе, часть НИЗ для медицинских исследований, через грант номер 1-DP2-OD004309-01. СБС-N. хотел бы поблагодарить NSF для стипендий исследований.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Reagents: | ||||
| Pepsin | Sigma-Aldrich | p6887-1G | Lyophilized | |
| Biotin | Thermo Scientific | 21217 | ||
| Neutravidin-HRP | Thomas Scientific | 21130 | ||
| Equipment: | ||||
| Wiley Mini Mill | Thomas Scientific | 3383L10 | ||
| Labconco Lyophilizer | Labconco, Inc | 7670520 | ||
| Surgical supplies: | ||||
| Betadine | Purdue Products, L.P. | 67618-154-16 | ||
| Lactated Ringers Solution | MWI | 003966 | ||
| KY Jelly | MWI | 28658 | ||
| Lidocaine, 2% | MWI | 17767 | ||
| Buprenorphine hydrochloride | Reckitt Benckiser Healthcare (UK) Ltd. | 12496-0757-1 | ||
| Artificial tear ointment | Fisher | NC9860843 | ||
| Triple antibiotic ointment | Fisher | 19082795 | ||
| Isoflurane | MWI | 60307-120-25 | ||
| Otoscope | MWI | 008699 | ||
| Stop cock | MWI | 006245 | ||
| 3-0 Vicrile suture | MWI | J327H | ||
| 5-0 Proline suture | MWI | s-1173 | ||
| Reverse cutting (RC) needle | Ethicon | 8684G | ||
| Microhemostats | Fine Science Tools | 13013-14 | ||
| Rat tooth microforceps | Fine Science Tools | 11084-07 | ||
| No. 10 scalpel | Fine Science Tools | 10110-01 | ||
| Blunt scissors | Fine Science Tools | 14108-09 | ||
| Sharp, curved scissors | Fine Science Tools | 14085-08 | ||
| Large, serrated forceps | Fine Science Tools | 1106-12 | ||
| PE160 suction tubing | BD | 427430 | ||
| Clippers | MWI | 21608 | ||
| Skin staples/stapler | Ethicon | PRR35 | ||
| General supplies: | ||||
| Stir plates | ||||
| 0.1 M HCl | ||||
| 1 M NaOH | ||||
| 10x PBS | ||||
| 1x PBS | ||||
| 70% Ethanol | ||||
| 0.1 mL syringes | ||||
| 10 mL syringe | ||||
| Q-tips | ||||
| Surgical glue | ||||
| Surgical drape | ||||
| Towel clamps | ||||
| Small hand-held vacuum |
Referências
- Seif-Naraghi, S. B., Salvatore, M. A., Magoffin-Schup, P. J., Hu, D. P., Christman, K. L. Design and characterization of an injectable pericardial matrix gel: A potentially autologous scaffold for cardiac tissue engineering. Tissue Engineering. , (2009).
- Freytes, D. O., Martin, J., Velankar, S. S., Lee, A. S., Badylak, S. F. Preparation and rheological characterization of a gel form of the porcine urinary bladder matrix. Biomaterials. 29, 1630-1630 (2008).
- Gilbert, T. W., Sellaro, T. L., Badylak, S. F. Decellularization of tissues and organs. Biomaterials. 27, 3675-3675 (2006).
- Liao, J., Joyce, E. M., Sacks, M. S. Effects of decellularization on the mechanical and structural properties of the porcine aortic valve leaflet. Biomaterials. 29, 1065-1065 (2008).
- Singelyn, J. M., DeQuach, J. A., Seif-Naraghi, S. B., Littlefield, R. B., Schup-Magoffin, P. J., Christman, K. L. Naturally derived myocardial matrix as an injectable scaffold for cardiac tissue engineering. Biomaterials. 30, 5409-5409 (2009).
- Christman, K. L., Vardanian, A. J., Fang, Q., Sievers, R. E., Fok, H. H., Lee, R. J. Injectable fibrin scaffold improves cell transplant survival, reduces infarct expansion, and induces neovasculature formation in ischemic myocardium. J Am Coll Cardiol. 44, 654-654 (2004).
- Christman, K. L., Fok, H. H., Sievers, R. E., Fang, Q., Lee, R. J. Fibrin glue alone and skeletal myoblasts in a fibrin scaffold preserve cardiac function after myocardial infarction. Tissue Eng. 10, 403-410 (2004).
- Huang, N. F., Sievers, R. E., Park, J. S., Fang, Q., Li, S., Lee, R. J. A rodent model of myocardial infarction for testing the efficacy of cells and polymers for myocardial reconstruction. Nat Protoc. (1), 1596-1609 (2006).
- Ott, H. C., Matthiesen, T. S., Goh, S. K., Black, L. D., Kren, S. M., Netoff, T. I. Perfusion-decellularized matrix: using nature’s platform to engineer a bioartificial heart. Nat Med. 14, 213-221 (2008).
- Badylak, S. F. The extracellular matrix as a biologic scaffold material. Biomaterials. 28, 3587-3593 (2007).
