심근 조직 공학을위한 생물학 유래 주사용 재료의 제조
Summary
decellularized 조직에서 주사용 매트릭스 젤을 준비하고 밀고 myocardium에 주입을위한 방법<em> 생체내에</em> 설명되어 있습니다.
Abstract
이 프로토콜은 심근 조직 공학 응용 프로그램을위한 주사용 세포외 매트릭스 (ECM) 젤의 준비를 위해 방법을 제공합니다. 간단히, decellularized 조직은 동결 건조된 가공된, 효소 소화하고 생리 산도로 이동합니다. lyophilization은 작은 공장과 함께 좋은 분말로 지상 수있는 건조 ECM의 결과, 조직의 모든 수분을 제거합니다. 밀링 후, ECM 분말은 주사용 매트릭스를 형성하는 펩신과 소화 수 있습니다. 산도 7.4로 조정 후, 액체 매트릭스 자료는 myocardium에 주입 수 있습니다. 이전 특성화 assays의 결과 decellularized pericardial와 심근 조직에서 생산 매트릭스 젤은 다양한 단백질, 펩티드 및 glycosaminoglycans를 포함한 원시 ECM 구성 요소를 유지하는 것으로 나타났습니다. 조직 공학이 자료의 사용을 감안할 때, 생체내 특성화에 특히 유용합니다, 여기에, 왼쪽 심실로 교내 주사를 수행하기위한 방법 (LV) 무료 벽이있는 매트릭스 젤에 대한 호스트 응답을 분석하는 수단으로 제공됩니다 작은 동물 모델. 흉강에 대한 액세스가 격막을 통해 얻은이며 주사는 약간 LV 무료 벽 꼭대기 위에 이루어집니다. 생물 학적 파생된 발판이 주입하기 전에 비오틴 – 라벨로 시각하고 다음 기다려봐 퍼옥시데이즈 – 복합 neutravidin과 조직 섹션을 얼룩하고 diaminobenzidine (DAB) 얼룩을 통해 시각화 수 있습니다. 사출 지역의 분석도 histological과 immunohistochemical 얼룩과 함께 할 수 있습니다. 이런 방식으로, 이전에 검사 pericardial 및 심근 매트릭스 젤은 섬유, 다공성 네트워크를 형성하고 사출 지역 내의 혈관 형성을 촉진하기 위해 표시되었습니다.
Protocol
Discussion
이 방법은 심근 조직 공학을위한 생물학 파생, 주사용 공사장 공중 발판의 생성을 허용합니다. 이 방법은 처음 제조를 위해 개발되었고 심근 매트릭스 젤 및 pericardial 매트릭스 젤과 함께 제시의 생체내 시험에서이 프로토콜은 다른 조직과 함께 사용하기 위해 적응 수 있지만, 조직이 적절하게 decellularized 수를 제공했습니다. Decellularization이 수행하고 매트릭스 젤의 DNA의 존재가 원치 않는 ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 부여 번호 1 – DP2 – OD004309 – 01을 통해 NIH 원장의 새로운 이노 보너스 프로그램, 의학 연구에 대한 NIH 로드맵의 일부에 의해 부분적으로 지원되었다. SBS – N. 대학원 연구 활동에 대한 NSF 감사하고 싶습니다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Reagents: | ||||
| Pepsin | Sigma-Aldrich | p6887-1G | Lyophilized | |
| Biotin | Thermo Scientific | 21217 | ||
| Neutravidin-HRP | Thomas Scientific | 21130 | ||
| Equipment: | ||||
| Wiley Mini Mill | Thomas Scientific | 3383L10 | ||
| Labconco Lyophilizer | Labconco, Inc | 7670520 | ||
| Surgical supplies: | ||||
| Betadine | Purdue Products, L.P. | 67618-154-16 | ||
| Lactated Ringers Solution | MWI | 003966 | ||
| KY Jelly | MWI | 28658 | ||
| Lidocaine, 2% | MWI | 17767 | ||
| Buprenorphine hydrochloride | Reckitt Benckiser Healthcare (UK) Ltd. | 12496-0757-1 | ||
| Artificial tear ointment | Fisher | NC9860843 | ||
| Triple antibiotic ointment | Fisher | 19082795 | ||
| Isoflurane | MWI | 60307-120-25 | ||
| Otoscope | MWI | 008699 | ||
| Stop cock | MWI | 006245 | ||
| 3-0 Vicrile suture | MWI | J327H | ||
| 5-0 Proline suture | MWI | s-1173 | ||
| Reverse cutting (RC) needle | Ethicon | 8684G | ||
| Microhemostats | Fine Science Tools | 13013-14 | ||
| Rat tooth microforceps | Fine Science Tools | 11084-07 | ||
| No. 10 scalpel | Fine Science Tools | 10110-01 | ||
| Blunt scissors | Fine Science Tools | 14108-09 | ||
| Sharp, curved scissors | Fine Science Tools | 14085-08 | ||
| Large, serrated forceps | Fine Science Tools | 1106-12 | ||
| PE160 suction tubing | BD | 427430 | ||
| Clippers | MWI | 21608 | ||
| Skin staples/stapler | Ethicon | PRR35 | ||
| General supplies: | ||||
| Stir plates | ||||
| 0.1 M HCl | ||||
| 1 M NaOH | ||||
| 10x PBS | ||||
| 1x PBS | ||||
| 70% Ethanol | ||||
| 0.1 mL syringes | ||||
| 10 mL syringe | ||||
| Q-tips | ||||
| Surgical glue | ||||
| Surgical drape | ||||
| Towel clamps | ||||
| Small hand-held vacuum |
Referências
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