成虫ゼブラフィッシュの部分肝切除術
Summary
このプロトコルは、肝臓再生の研究を可能にするために、成体ゼブラフィッシュの肝臓の腹側葉を除去するための手順を説明します。
Abstract
肝不全は世界的に主要な死因の一つであり、慢性肝疾患による死亡率は米国で急激に増加している。健康な肝臓は、毒性の損傷から再生することができるが、先進の肝疾患では、再生する肝臓の自然な能力が損なわれる。ゼブラフィッシュは、再生を研究するための強力な実験システムとして登場しました。それらは部分的な肝切除術からの肝臓再生を研究するための理想的なモデルであり、肝臓の一部が外科的に除去され、残りはそのまま残る直接的な臨床的関連性を有する処置である。部分肝切除術のための標準的なプロトコルはありません。このモデルを使用した以前の研究では、わずかに異なるプロトコルを使用し、異なる結果を報告しました。ここで説明する、成体ゼブラフィッシュの部分肝切除術を行うための効率的で再現可能なプロトコルである。この技術を用い、ゼブラフィッシュが切除された葉のエピモルフィック再生が可能であることを実証する。このプロトコルは、ゼブラフィッシュの肝臓再生に必要なメカニズムをさらに調べるのに使用できます。
Introduction
ヒトの固体器官の中で、肝臓は再生可能な唯一の器官である1.これは肝が必須臓器であるため、重要な代謝機能、エネルギー貯蔵、血液解毒、血漿タンパク質の分泌、胆汁産生を担う重要な2である。毒性または炎症性の損傷のために失われた肝細胞は、主に残りの肝細胞の分裂によって置換される1.肝臓再生を研究するための古典的な実験モデルの1つは、肝臓の個々の葉が除去され、残りの葉がそのまま残っている部分肝切除術である3.この手順は、最初にラットで開発されました, 肝臓の質量の約3分の2が除去されます.哺乳類の部分的な肝切除術の後、肝臓が最初の質量を回復するまで残りの葉に代償性再生が起こる。特に、哺乳類の肝臓は欠けている葉を置き換えません。
ゼブラフィッシュ(ダニオ・レリオ)は、成人臓器再生4を研究するための難解なモデルを表す。ゼブラフィッシュ肝臓は、哺乳類の肝臓と構造的に異なるが、同じ細胞タイプで構成され、哺乳動物2と同じ機能を果たす。それは3つの葉で構成され、2つの後部葉と腸に沿って平らにされる単一の腹側葉がある。部分的な肝切除術は、以前にゼブラフィッシュで行われ、再生の正確なモードに関して矛盾するアカウントを持つ。典型的には、腹側葉全体の除去によって3分の1分の肝切除術が行われる。最初の報告では、腹側葉を除去した後、1週間5、6、7以内に完全に再生し、哺乳類の肝臓とは対照的に、ゼブラフィッシュ肝臓はエピモルフィック再生が可能であることを示唆した。その後の研究では、腹側葉の除去は、行方不明の腹側葉の再生ではなく、後部葉の代償性再生をもたらし、最終的には週8、9以内に肝臓質量の回復をもたらした。腹側葉の切除後の側葉の転写的プロファイリングは、代償性再生10に関連する有意な変化を明らかにした。肝再生の様式は傷害8の程度によって変化する可能性があることを考えると、結果の不一致は研究グループ間の部分肝切除プロトコルの技術的変動によるものかもしれないと推測した。
このプロトコルは、腹側葉を除去することによって成体ゼブラフィッシュに3分の1の部分肝切除術を行うための手順を記述する。この技術は、肝再生のメカニズムを評価するために有用である。
Protocol
Representative Results
Discussion
肝臓再生のためのゼブラフィッシュと哺乳類モデルの解剖学的な違いは、肝臓切除に独特の課題を提示する。ゼブラフィッシュの肝臓は心臓と腸の近くにあります。誤ってどちらかの臓器にダメージを与えると、死亡率が増加する。ゼブラフィッシュの肝臓はカプセル化されておらず、腸から分離することがより困難になります。肝臓は、門脈を介して腸から栄養豊富な血液を受け取ります….
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
I.M.O.は、NIAAA(F32AA027135)によってサポートされています。W.G.は、R01DK090311、R01DK105198、R24OD017870、およびがん研究の卓越性のためのクラウディア・アダムス・バー・プログラムによってサポートされています。W.G.は生物医学のピュー学者です。
Materials
| 16% Paraformaldehyde Aqueous Solution, EM Grade | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 50 mL Falcon Centrifuge Tubes, Polypropylene, Sterile | Corning | 352098 | |
| AS 82/220.R2 PLUS Analytical Balance | Bay State Scale & Systems, INC. | WL-104-1051 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| EMS Kuehne Coverglass/Specimen Forceps | Electron Microscopy Sciences | 72997-07 | |
| Epifluorescence microscope | Zeiss | Discovery.V8 | |
| Mastertop Cellulose Cleaning Scrub Sponge | Amazon | B07CBSM53Z | |
| PBS10X Liquid Conc 4L | EMD Millipore | 6505-4L | |
| Super Fine Micro Scissors, 3 1/4" straight | Biomedical Research Instruments | 11-1020 | |
| Tricaine methanesulfonate | Syndel | TRIC-M-GR-0010 | |
| Tween 20, Fisher BioReagents | Fischer Scientific | BP337-500 |
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