Produção Hepática de Glicose, Urateagênese e Lipólise Quantificada usando o Modelo de Fígado de Camundongo Perfundido

Marie Winther-Sørensen; Ida Marie Kemp; Hanne Cathrine Bisgaard; Jens Juul Holst; Nicolai J. Wewer Albrechtsen

doi:10.3791/65596

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Artigo de método

Produção Hepática de Glicose, Urateagênese e Lipólise Quantificada usando o Modelo de Fígado de Camundongo Perfundido

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DOI:

10.3791/65596

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6 de outubro de 2023

Marie Winther-Sørensen¹^,²^,³ , Ida Marie Kemp¹^,³ , Hanne Cathrine Bisgaard⁴ , Jens Juul Holst¹^,⁵ , Nicolai J. Wewer Albrechtsen²^,³

¹Department of Biomedical Sciences, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ²NNF Center for Protein Research, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ³Department for Clinical Biochemistry, Copenhagen University Hospital - Bispebjerg and Frederiksberg, ⁴Department of Cellular and Molecular Medicine, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ⁵NNF Center for Basic Metabolic Research, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen

Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos um método robusto de perfusão in situ do fígado de camundongos para estudar a regulação aguda e direta do metabolismo hepático sem perturbar a arquitetura hepática, mas na ausência de fatores extra-hepáticos.

Resumo

O fígado tem inúmeras funções, incluindo o metabolismo de nutrientes. Em contraste com outros modelos in vitro e in vivo de pesquisa hepática, o fígado perfundido isolado permite o estudo da biologia e metabolismo hepático em todo o fígado com uma arquitetura hepática intacta, separada da influência de fatores extra-hepáticos. As perfusões hepáticas foram originalmente desenvolvidas para ratos, mas o método também foi adaptado para camundongos. Descrevemos aqui um protocolo de perfusão in situ do fígado de camundongos. O fígado é perfundido anterógrado através da veia porta com tampão de bicarbonato de Krebs-Henseleit oxigenado, e o débito é coletado da veia cava inferior supra-hepática com pinçamento da veia cava inferior infra-hepática para fechar o circuito. Usando este método, os efeitos hepáticos diretos de um composto de teste podem ser avaliados com uma resolução temporal detalhada. A função e a viabilidade hepática são estáveis por pelo menos 3 h, permitindo a inclusão de controles internos no mesmo experimento. As possibilidades experimentais utilizando este modelo são inúmeras e podem inferir conhecimentos sobre a fisiologia hepática e doenças hepáticas.

Introdução

O fígado é um órgão essencial no metabolismo. Ele desempenha um papel fundamental no controle do equilíbrio energético de todo o corpo, regulando o metabolismo de glicose, lipídios e aminoácidos. O aumento das doenças hepáticas em todo o mundo está emergindo como um grande fardo global para a saúde, e mais conhecimento é necessário sobre a fisiopatologia e suas consequências para as funções hepáticas.

Vários modelos in vitro têm sido desenvolvidos para pesquisas no fígado para complementar os estudos in vivo. Hepatócitos primários isolados e cultivados de roedores e humanos são amplamente utilizados. Células não-parenquima....