Hamster Oosit ve Fare Embriyolar Toplama ve Kriyoprezervasyon
Summary
Bu video-makale-çözülme sonrası sağkalım oranları yüksek bir hamster oosit toplamak ve cryopreserve nasıl bir adım-adım gösteri sunuyoruz. Aynı işlem, başarılı bir şekilde dondurma ve preimplantasyon gelişimi farklı aşamalarında fare embriyoları Çözülme uygulanabilir.
Abstract
Zaman Whittingham Embriyolar ve oositlerin ilk başarıyla, 30 yıldan daha uzun önce Kriyoprezerve edildi<i> Ve ark.</i><sup> 1</sup> Ve Wilmut<sup> 2</sup> Ayrı Parkening fare embriyoları ° C ve birkaç yıl sonra -196 dondurulur ve saklanır olabilir tanımlanmıştır<i> Ve ark.</i>.<sup> 3</sup> Kriyoprezerve oositlerin in vitro fertilizasyon (IVF) kaynaklanan canlı yavrular doğum bildirdi. O zamandan beri, kriyoprezervasyon teknikleri kullanımı, insan ve hayvan üremeye yardımcı uygulama ve hayvan genetik kaynaklarının korunması konusunda önemli bir bileşeni haline hızla yayıldı. Yavaş dondurma ve vitrifikasyon: Şu anda, oosit ve embriyoların cryopreserve için kullanılan iki ana yöntem vardır. Kriyoprezerve embriyolar, hayvan ve binlerce çocuk her iki tekniğin ve milyonlarca artırmak için çok çeşitli yaklaşımlar denemek için kullanılmıştır doğmuştur. Ancak, dondurulması ile ilişkili önemli eksikliklerin hala buz kristali oluşumu, çözüm etkileri ve ozmotik şok sonrası çözülmüş oosit ve embriyolarda çeşitli cryoinjuries neden olacak gibi görünüyor bu yana, aşılabilir. Programlanabilir dondurucular Yavaş dondurma genellikle kimyasal toksisite ve ozmotik şok ile ilişkilidir cryoprotectants, düşük konsantrasyonlarda kullanılarak avantajı vardır, ama düşük konsantrasyonlarda buz kristali oluşumunu önlemek için yeteneği sınırlıdır. Yavaş dondurma, ayrıca manuel veya otomatik tohumlama kullanarak kaçınılmalıdır soğuma etkileri indükler<sup> 4</sup>. Vitrifikasyon süreçte, yüksek konsantrasyonlarda cryoprotectants buz kristallerinin oluşumunu engeller ve su katılaşmış olduğu bir glasslike vitrifiye devlet oluşumuna yol, ancak genişletilmiş değil. Ancak, kullanılan konsantrasyonlarda cyroprotectants toksisite nedeniyle oosit / embriyoları sıvı nitrojen içinde doğrudan örnekleri daldırarak önce, zaman çok kısa sürede ve en az bir ses çözümü dölveriminin çözüm maruz bırakılmamalıdır.<sup> 5</sup>. Pahalı ekipman (programlanabilir dondurucu) gerekli olduğu çok hızlı bir yöntem olması nedeniyle son on yıl içinde, vitrifikasyon daha popüler hale gelmiştir. Ancak, yavaş dondurma oosit / embriyo dondurulması için en yaygın kullanılan yöntem olmaya devam etmektedir. Bu video-makale-çözülme sonrası sağkalım oranları yüksek bir hamster oosit toplamak ve yavaş yavaş dondurma nasıl adım adım göstermektedir. Aynı işlem, başarılı bir şekilde dondurma ve preimplantasyon gelişimi farklı aşamalarında fare embriyoları Çözülme uygulanabilir.
Protocol
Discussion
Bu protokol, bir hamster oosit ve fare embriyoları ile başarıyla Kriyoprezerve olabilir. Bir kez dondurulmuş, oosit / embriyoların sıvı nitrojen tanklarında süresiz saklanır ve istenilen herhangi bir yerde veya zamanda telafi edilebilir. Bu ihtiyaç duyulduğunda kullanmak örneklerin neredeyse hazır sahip olmanın avantajını sunar. Öte yandan, bu protokol de, canlı hayvan kolonileri bakımı, ekonomik ve güvenli bir alternatif olarak değerli fare suşları (transgenik hatları gibi), embriyo cryobanks oluşturmak için kul…
Acknowledgements
Bu çalışma, İspanyol Ministerio de educacion y Ciencia (BIO 2.006-11.792) ve Generalitat de Catalunya (2005-SGR00437) tarafından desteklenmiştir . Yazarlar medya hazırlanmasında Marc Puigcerver ve Jonatan Lucas kendi teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum. Servei d'Estabulari tüm personeli, hayvan barınağı için kabul ve özellikle bu video kayıt ek katkı Juan Jose Martin ve Javier Benito. NCB Ciencia e Tecnologia ve SG, Portekizce Fundação para İspanyolca Ministerio de educacion y Ciencia bir adam bir adam .
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| French type mini-straw 0.25 ml | Mini-tub | 13407/0010 | ||
| hCG | Farma-Lepori, Spain | 749036.4 | ||
| Hyaluronidase | Sigma | H-3884 | ||
| KSOM-H medium | Ref. [11] | |||
| Liquid Nitrogen | Air Liquide | |||
| Plastic plugs | Mini-tub | 19046 | ||
| PMSG | Intervet, Spain | 1.614/8447 | ||
| Propilenglycol | Fluka | 82280 | ||
| Sucrose | Merck | 107687 | ||
| Surgical Scissors | Aesculap | BC-060R; BG-061R | ||
| Thermo-sealer | SIZ | 220 | ||
| 35 and 90 mm culture dishes | Nunc | 153066; 150350 | ||
| 10 ml tubes | Greiner Bio-one | 163160 | ||
| Nitrogen tank | MVE, Cryogenics | XC 43/28 | ||
| Programmable Freezer | Planner Products Ltd. | Kryo-10 Series III | ||
| Forceps | Aesculap | BD-331R; BD-053R; OC-020R |
References
- Whittingham, D. G., Leibo, S. P., Mazur, P. Survival of mouse embryos frozen to -196 and -269 °C. Science. 178, 411-414 (1972).
- Wilmut, I. The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of development on survival of mouse embryos during freezing and thawing. Life Sci. 11, 1071-1079 (1972).
- Parkening, T. A., Tsunoda, Y., Chang, M. C. Effects of various low temperatures, cryoprotective agents and cooling rates on the survival, fertilizability and development of frozen-thawed mouse eggs. J. Exp. Zool. 197, 369-374 (1976).
- Schneider, U. Cryobiological principles of embryo freezing. J. In Vitro Fert. Embryo Transf. 3, 3-9 (1986).
- Vajta, G., Kuwayama, M. Improving cryopreservation systems. Theriogenology. 65, 236-244 (2006).
- Duselis, A. R., Vrana, P. B. Retrieval of mouse oocytes. JoVE. 3, (2007).
- Lassalle, B., Testart, J., Renard, J. P. Human embryo features that influence the success of cryopreservation with the use of 1,2 propanediol. Fertil. Steril. 44, 645-651 (1985).
- Ibáñez, E., Grossmann, M., Vidal, F., Egozcue, J., Santaló, J. Cryopreservation of caprine beta-lactoglobulin transgenic mouse embryos. Cryobiology. 35, 290-298 (1997).
- Dinnyes, A., Wallace, G. A., Rall, W. F. Effect of genotype on the efficiency of mouse embryo cryopreservation by vitrification or slow freezing. Mol. Reprod. Dev. 40, 429-435 (1995).
- Tateno, H., Kamiguchi, Y., Mikamo, K. A freezing and thawing method of hamster oocytes designed for both the penetration test and chromosome assay of human spermatozoa. Mol. Reprod. Dev. 33, 202-209 (1992).
- Biggers, J., McGuinnis, L. K., Raffin, M. Amino acids and preimplantation development of the mouse in the protein-free KSOM. Biol. Reprod. 63, 281-293 (2000).
