ניטור הורמונים צמחיים במהלך התגובות מתח
Summary
השיטה הפשוטה היא ובלבד מאפשר מיצוי ניתוח מהיר של הורמונים צמחיים מרובים דגימות רקמה קטנות. הליך משתמשת מיצוי שלב אדי כצעד טיהור חגיגית. דוגמאות מנותחות על ידי GC / MS עם יינון כימי שמייצר בעיקר (M 1) יונים +.
Abstract
הורמוני הצמח תרכובות איתות הקשורים לשחק תפקיד חשוב בוויסות של תגובות צמחים לגירויים סביבתיים ומדגיש שונים. בין מדגיש חמורים ביותר הם herbivory חרקים, זיהום הפתוגן, ומתח הבצורת. עבור כל אחד מהם מדגיש קבוצה מסוימת של הורמונים ו / או צירופם של אלה ידועים לכוונן את התגובות, ובכך להבטיח הישרדות של הצמח. ההורמונים העיקריים המעורבים בוויסות של תגובות אלה חומצה jasmonic (JA), חומצה סליצילית (SA), וחומצה abscisic (ABA). כדי להבין טוב יותר את התפקיד של הורמונים הפרט, כמו גם אינטראקציה הפוטנציאל שלהם במהלך התגובות הללו יש צורך לעקוב אחר השינויים השפע שלהם הזמני כמו גם בצורה מרחבית. עבור כימות קל, רגיש, לשעתקו אלה ותרכובות אחרות איתות פיתחנו שיטה המבוססת על מיצוי שלב אדי כרומטוגרפיה / ספקטרומטריית מסה גז (GC / MS) ניתוח (1, 2, 3, 4). לאחר חילוץ התרכובות הללו מרקמות הצמח על ידי מימית חומצית 1-propanol מעורבב עם dichloromethane חומצה המכילים תרכובות carboxylic הם מפוגל, מתאיידים תחת חום, שנאספו על סופג פולימריות. לאחר elution לתוך בקבוקון מדגם analytes מופרדים על ידי גז כרומטוגרפיה ו זוהה על ידי ספקטרומטריית יינון כימי המוני. השימוש בסטנדרטים הפנימי המתאים ואז מאפשרת כימות פשוט על ידי הנוגעים בתחומים השיא של תקן אנליטי ופנימיים.
Protocol
Discussion
השיטה המוצגת כאן הוכח לעבוד באופן מהימן עבור מגוון רחב של תרכובות צמחים איתות ובלבד גודל ואת האופי הכימי של המתחם אינו למנוע ממנו חילוץ, מפוגל, ו מתאדה. כמו כן, הליך מתילציה כפי שהוא מתואר במסמך זה לא הדרך היחידה של derivatization. Silyllation ו acetylation הן שיטות חלופיות ופרוטוקולים ?…
References
- Schmelz, E. A., Engelberth, J., Tumlinson, J. H., Alborn, H. T. The use of vapor phase extraction in metabolic profiling of phytohormones and other metabolites. Plant Journal. 39, 790-808 (2004).
- Engelberth, J., Alborn, H. T., Schmelz, E. A., Tumlinson, J. H. Airborne signals prime plants against insect herbivore attack. PNAS. 101, 1781-1785 (2004).
- Schmelz, E. A., Engelberth, J., Alborn, H. T., O´, D. o. n. n. e. l., Sammons, P., Toshima, M., H, J. H. T. u. m. l. i. n. s. o. n. Simultaneous analysis of phytohormones, phytotoxins, and volatile organic compounds in plants. PNAS. 100, 10552-10557 (2003).
- Engelberth, J., Schmelz, E. A., Alborn, H., Cardoza, Y. J., Huang, J., Tumlinson, J. H. Simultaneous Quantification of Jasmonic acid and Salicylic acid by Vapor Phase Extraction and Gas Chromatography – Chemical Ionization-Mass Spectrometry. Analytical Biochemistry. 312, 242-250 (2003).
