Мониторинг завод гормонов во время реакции на стресс
Summary
Простой метод при условии, что дает возможность быстрого извлечения и анализа нескольких гормонов растений из небольшого образца ткани. Процедура использует пар экстракции как торжественные стадии очистки. Все результаты измеряются с помощью ГХ / МС с химической ионизации, которая производит в основном (M +1) + ионов.
Abstract
Завод гормонов и связанных с ним сигнализации соединения играют важную роль в регуляции завод реакции на различные стимулы окружающей среды и стрессов. Среди наиболее серьезных напряжений насекомых herbivory, возбудитель инфекции, и засухи. Для каждого из этих напряжений определенный набор гормонов и / или их комбинации, как известно, тонкая настройка ответов, тем самым обеспечивая выживание растений. Основных гормонов, участвующих в регулировании этих ответов жасмоновой кислота (JA), салициловая кислота (SA), и абсцизовой кислоты (АБК). Чтобы лучше понять роль отдельных гормонов, а также их потенциал взаимодействия в ходе этих реакций необходимо следить за изменениями в их обилие в временных, так и в пространственной форме. Для простой, чувствительный, и воспроизводимых количественных эти и другие сигнальные соединения мы разработали метод, основанный на паром экстракции и газовой хроматографии / масс-спектрометрии (GC / MS) анализ (1, 2, 3, 4). После извлечения этих соединений из растительной ткани при кислой водной 1-пропанол смешиваются с дихлорметана карбоновой кислоты содержащих соединения метилированной, испаряется под воздействием высокой температуры, и собираются на полимерные абсорбента. После элюирования в пузырек аналитов разделены с помощью газовой хроматографии и обнаружены химические масс-спектрометрии с ионизацией. Использование соответствующих внутренних стандартов затем позволяет по той простой количественный, связывая площадей пиков анализируемого и внутреннего стандарта.
Protocol
Discussion
Метод, представленный здесь, как доказывали, надежно работать для широкого спектра растений сигнализации соединений при условии, что размер и химической природе соединение не мешает ему быть извлечены, метилированный, и испаряется. Кроме того, метилирование процедуру, как это описано …
References
- Schmelz, E. A., Engelberth, J., Tumlinson, J. H., Alborn, H. T. The use of vapor phase extraction in metabolic profiling of phytohormones and other metabolites. Plant Journal. 39, 790-808 (2004).
- Engelberth, J., Alborn, H. T., Schmelz, E. A., Tumlinson, J. H. Airborne signals prime plants against insect herbivore attack. PNAS. 101, 1781-1785 (2004).
- Schmelz, E. A., Engelberth, J., Alborn, H. T., O´, D. o. n. n. e. l., Sammons, P., Toshima, M., H, J. H. T. u. m. l. i. n. s. o. n. Simultaneous analysis of phytohormones, phytotoxins, and volatile organic compounds in plants. PNAS. 100, 10552-10557 (2003).
- Engelberth, J., Schmelz, E. A., Alborn, H., Cardoza, Y. J., Huang, J., Tumlinson, J. H. Simultaneous Quantification of Jasmonic acid and Salicylic acid by Vapor Phase Extraction and Gas Chromatography – Chemical Ionization-Mass Spectrometry. Analytical Biochemistry. 312, 242-250 (2003).
