Monitoramento hormônios vegetais Durante Respostas ao Estresse
Summary
Um método simples é fornecida que permite a extração rápida e análise de hormônios vegetais múltiplos a partir de pequenas amostras de tecido. O procedimento utiliza extração em fase vapor como a etapa de purificação solene. As amostras são analisadas por íons GC / MS com ionização química que produz principalmente (M +1) +.
Abstract
Hormônios vegetais e compostos relacionados sinalização desempenhar um papel importante na regulação da resposta das plantas a diversos estímulos ambientais e tensões. Entre as tensões mais graves são herbivoria de insetos, infecção do patógeno e estresse hídrico. Para cada um destes sublinha um conjunto específico de hormônios e / ou suas combinações, são conhecidos por fazer um ajuste fino das respostas, garantindo assim a sobrevivência da planta. Os principais hormônios envolvidos na regulação dessas respostas são o ácido jasmônico (JA), ácido salicílico (SA), e ácido abscísico (ABA). Para entender melhor o papel dos hormônios individuais, bem como sua interação em potencial durante essas respostas é necessário para monitorar as mudanças em sua abundância em um temporal, assim como de uma forma espacial. Para a quantificação fácil, sensível e reprodutível destes e de outros compostos de sinalização foi desenvolvido um método baseado na extração em fase vapor e cromatografia / espectrometria de massa de gás análise (GC / MS) (1, 2, 3, 4). Depois de extrair estes compostos a partir do tecido vegetal por aquosa ácida 1-propanol misturado com diclorometano contendo o ácido carboxílico compostos são metilados, volatilizado sob o calor, e recolhidos em um absorvente polimérico. Após eluição em um frasco de amostra dos analitos são separados por cromatografia gasosa e detectada por espectrometria de massa de ionização química. O uso de normas internas apropriadas, em seguida, permite a quantificação simples, relacionando as áreas dos picos de analito e padrão interno.
Protocol
Discussion
O método apresentado aqui tem sido comprovada para o trabalho de forma confiável para uma grande variedade de compostos de plantas de sinalização desde que o tamanho ea natureza química do composto não impedir que ele seja extraído, desnaturado, e vaporizado. Além disso, o processo de metilação como é descrito aqui não é a única maneira de derivatização. Silyllation e acetilação são métodos alternativos e protocolos pode ser facilmente encontrado on-line.
Se o espectrôme…
References
- Schmelz, E. A., Engelberth, J., Tumlinson, J. H., Alborn, H. T. The use of vapor phase extraction in metabolic profiling of phytohormones and other metabolites. Plant Journal. 39, 790-808 (2004).
- Engelberth, J., Alborn, H. T., Schmelz, E. A., Tumlinson, J. H. Airborne signals prime plants against insect herbivore attack. PNAS. 101, 1781-1785 (2004).
- Schmelz, E. A., Engelberth, J., Alborn, H. T., O´, D. o. n. n. e. l., Sammons, P., Toshima, M., H, J. H. T. u. m. l. i. n. s. o. n. Simultaneous analysis of phytohormones, phytotoxins, and volatile organic compounds in plants. PNAS. 100, 10552-10557 (2003).
- Engelberth, J., Schmelz, E. A., Alborn, H., Cardoza, Y. J., Huang, J., Tumlinson, J. H. Simultaneous Quantification of Jasmonic acid and Salicylic acid by Vapor Phase Extraction and Gas Chromatography – Chemical Ionization-Mass Spectrometry. Analytical Biochemistry. 312, 242-250 (2003).
