Övervakning växt hormoner under stressreaktioner
Summary
En enkel metod finns som möjliggör för snabb extraktion och analys av flera växt hormoner från små vävnadsprover. Förfarandet använder ångfasen extraktion som det högtidliga reningssteget. Proverna analyseras med GC / MS med kemisk jonisering som producerar huvudsakligen (M 1) + joner.
Abstract
Plantera hormoner och liknande signalering föreningar spelar en viktig roll i regleringen av anläggningen reaktioner på olika stimuli från omgivningen och påfrestningar. Bland de mest svåra påfrestningar är insekt herbivori, patogener infektion, och torka stress. För varje av dessa betonar en specifik uppsättning av hormoner och / eller kombinationer av dessa är kända för att finjustera svaren, varigenom växtens överlevnad. De stora hormoner involverade i regleringen av dessa svar är jasmonic syra (JA), salicylsyra (SA) och Abscisic syra (ABA). För att bättre förstå vilken roll enskilda hormoner samt deras potentiella samspel under dessa svar är det nödvändigt att övervaka förändringar i överflöd i ett tidsmässigt och i en rumslig sätt. För lätt, känslig och reproducerbar kvantifiering av dessa och andra signalering föreningar vi utvecklat en metod baserad på ångfasen utvinning och gaskromatografi / masspektrometri (GC / MS) analys (1, 2, 3, 4). Efter att utvinna dessa ämnen ur växtvävnad av sura vattenlösningar 1-propanol blandas med diklormetan till karboxylsyra-innehållande föreningar är denaturerad, förflyktigas under värme, och samlas på ett polymert absorberande. Efter eluering i ett prov flaskan analyter separeras med hjälp av gaskromatografi och detekteras med kemisk jonisering masspektrometri. Användning av lämpliga interna standarder tillåter sedan av den enkla kvantifiering genom att relatera toppareorna av analyt och intern standard.
Protocol
Discussion
Den metod som presenteras här har visat sig fungera tillförlitligt för ett brett spektrum av växter signalering föreningar förutsatt att storleken och den kemiska beskaffenheten hos förening inte förhindra att den utvinns, denaturerad och förgasas. Dessutom är metylering förfarande som det beskrivs här inte det enda sättet att derivatisering. Silyllation och acetylering är alternativa metoder och protokoll kan vara lätt att hitta på nätet.
Om masspektrometer inte kan enstaka…
References
- Schmelz, E. A., Engelberth, J., Tumlinson, J. H., Alborn, H. T. The use of vapor phase extraction in metabolic profiling of phytohormones and other metabolites. Plant Journal. 39, 790-808 (2004).
- Engelberth, J., Alborn, H. T., Schmelz, E. A., Tumlinson, J. H. Airborne signals prime plants against insect herbivore attack. PNAS. 101, 1781-1785 (2004).
- Schmelz, E. A., Engelberth, J., Alborn, H. T., O´, D. o. n. n. e. l., Sammons, P., Toshima, M., H, J. H. T. u. m. l. i. n. s. o. n. Simultaneous analysis of phytohormones, phytotoxins, and volatile organic compounds in plants. PNAS. 100, 10552-10557 (2003).
- Engelberth, J., Schmelz, E. A., Alborn, H., Cardoza, Y. J., Huang, J., Tumlinson, J. H. Simultaneous Quantification of Jasmonic acid and Salicylic acid by Vapor Phase Extraction and Gas Chromatography – Chemical Ionization-Mass Spectrometry. Analytical Biochemistry. 312, 242-250 (2003).
