בידוד של Protoplasts מרקמות של 14 יום בן שתילים של ארבידופסיס thaliana</em
Summary
וידאו זה מציג את נוהל בידוד protoplasts שלם מרקמות של 14 יום בן שתילים של ארבידופסיס. בהתחשב בכך protoplasts מבודדים נותרו על כנן לפחות 96h והם מבודדים שתילים במקום אחד בן חודש צמחים בוגרים, הליך זה מזרז מבחני המחייב protoplasts ללא פגע.
Abstract
Protoplasts נמצאים בתאי צמח כי יש לו קירות התא שלהם הוסר enzymatically. בידוד של protoplasts מרקמות צמח שונים דווח לראשונה יותר מאשר לפני 40 שנה<sup> 1</sup> ומאז מותאם ללמוד מגוון רחב של תהליכים תאיים, כגון לוקליזציה subcellular של חלבונים, בידוד של אברונים שלמים ממוקד גנים איון על ידי כפול תקועים התערבות RNA (RNAi)<sup> 2-5</sup>. רוב הפרוטוקולים בידוד protoplast להשתמש ברקמות עלה של ארבידופסיס בוגר (למשל 35 יום בת צמחים)<sup> 2-4</sup>. שינינו פרוטוקולים הקיימים על ידי העסקת 14 יום בן שתילים ארבידופסיס. בהליך זה, גרם אחד של 14 יום בן שתילים הניבו 5 10<sup> 6</sup> -10<sup> 7</sup> Protoplasts כי נותרו על כנן לפחות 96 שעות. התשואה של protoplasts מן השתילים ניתן להשוות עם ההכנות מן העלים של ארבידופסיס בוגרת, אבל במקום 35-36 ימים, בידוד של protoplasts תושלם בתוך 15 ימים. זה מאפשר להקטין את זמן תא שטח הגידול הנדרשים בידוד protoplasts כאשר צמחים בוגרים נמצאים בשימוש, ו מזרז את המחקרים במורד הדורשים protoplasts ללא פגע.
Protocol
Discussion
כדי להבטיח תשואה גבוהה של protoplast שלם חשוב מאוד start-up עם צמחים בריאים. שימוש במסנן-לעקר פתרונות לבידוד protoplasts. זכור כי protoplasts שבירים. לכן, כאשר אתה מטפל protoplasts, לא מתערבבים, pipet או מערבולת אותם נמרצות מאז זה יהיה בלם אותם. במקום זאת, לערבב protoplasts ידי מסתובב לאט או מקליטה את הצ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי תחנת אוניברסיטת קורנל ניסוי חקלאי (CUAES) NYC-125433 הצוהר גרנט קורנל Start-Up גרנט הוענק OKV
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Murashige and Skoog Basal Salt Mixture (MS) | Sigma | M5524 | ||
| Agar | Sigma | A1296 | ||
| Petri Dishes (100x15mm) | Kreckeler Scientific | 82-4001 | ||
| Cellulase (Onozuka R‐10) | RPI Corp | C32200 | ||
| Macerozyme (R10) | RPI Corp | M22010 | ||
| Cheesecloth wipes | Fisher Scientific | 06-665-29 | ||
| Lab Rotator | Fisher Scientific | 1167152Q | ||
| Allegra X‐15R Centrifuge | VWR | 392932 | ||
| Axioskop2 Plus Microscope | Zeiss |
References
- Cocking, E. C. A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles. Nature. 187, 962-963 (1960).
- Chen, S., Halkier, B. A. Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus. J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).
- Robert, S., Zouhar, J., Carter, C., Raikhel, N. Isolation of intact vacuoles from Arabidopsis rosette leaf-derived protoplasts. Nat. Protocols. 2, 259-262 (2007).
- Yoo, S. D., Cho, Y. H., Sheen, J. Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis. Nat Protoc. 2, 1565-1572 (2007).
- Zhai, Z., Sooksa-nguan, T., Vatamaniuk, O. K. Establishing RNAi as a reverse genetic approach for gene functional analysis in protoplasts. Plant Phys. 149, 642-652 (2009).
