וידאו זה מציג את נוהל בידוד protoplasts שלם מרקמות של 14 יום בן שתילים של ארבידופסיס. בהתחשב בכך protoplasts מבודדים נותרו על כנן לפחות 96h והם מבודדים שתילים במקום אחד בן חודש צמחים בוגרים, הליך זה מזרז מבחני המחייב protoplasts ללא פגע.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
בידוד של Protoplasts מרקמות של 14 יום בן שתילים של ארבידופסיס thaliana
במאמר זה
סיכום
תקציר
Protoplasts נמצאים בתאי צמח כי יש לו קירות התא שלהם הוסר enzymatically. בידוד של protoplasts מרקמות צמח שונים דווח לראשונה יותר מאשר לפני 40 שנה
פרוטוקול
חלק 1. הכנת בינוני מוצק לגידול צמחים.
אנחנו בדרך כלל מפעלי התרבות על מדיום מרוכז (MS) ו Murasige Skoog בתוספת 1% סוכרוז ו אגר 0.7%. הוא מכיל את כל המרכיבים הדרושים כדי לשמור על צמחים בריאים.
להכנת 1 ליטר של MS, מדיה pH 5.7
- הוסף 2.15 גר 'של MS האבקה לתוך 800 מ"ל מים בבקבוק 1.5-2.0L autoclavable.
- המקום בר ערבוב לתוך הבקבוק ואת לפזר אבק....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
כדי להבטיח תשואה גבוהה של protoplast שלם חשוב מאוד start-up עם צמחים בריאים. שימוש במסנן-לעקר פתרונות לבידוד protoplasts. זכור כי protoplasts שבירים. לכן, כאשר אתה מטפל protoplasts, לא מתערבבים, pipet או מערבולת אותם נמרצות מאז זה יהיה בלם אותם. במקום זאת, לערבב protoplasts ידי מסתובב לאט או מקליטה את הצינור צנטריפוגות. התשואה תיאר הליך protoplasts שלם כי הם קיימא לפחות 96 ח לכן, protoplasts ניתן ללמוד מגוון רחב של תהליכים תאיים, כגון לוקליזציה subcellular של חלבונים, בידוד ומנתח .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
הפטנט הזמנית המתאר הליך זה לשימושו מנתח פונקציונלית של גנים צמח הוגשו עם קורנל המרכז Enterprise טכנולוגיה מסחור (CCTEC), יוני 2008. יומן לא 50341/015001: Vatamaniuk, אישור Zhai, שיטת Z. עבור ניתוחים פונקציונלי מהיר של גנים צמחיים.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי תחנת אוניברסיטת קורנל ניסוי חקלאי (CUAES) NYC-125433 הצוהר גרנט קורנל Start-Up גרנט הוענק OKV
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| תערובת מלחים בסיסית של Murashige and Skoog (MS) | Sigma-Aldrich | M5524 | |
| אגר | Sigma-Aldrich | A1296 | |
| צלחות פטרי (100x15mm) | Krackeler Scientific, Inc. | 82-4001 | |
| צלולאז (OnozukaR‐10) | Research Products International Corp. | C32200 | |
| מקרזים (R10) | Research Products International Corp. | M22010 | |
| ניגוני בד גזה | Fisher Scientific | 06-665-29 | |
| רוטטור למעבדה | Fisher Scientific | 1167152Q | |
| צנטריפוגה AllegraX‐15R | VWR international | 392932 | |
| מיקרוסקופ Axioskop 2 Plus | Carl Zeiss, Inc. |
מקורות
- Cocking, E. C. A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles. Nature. 187, 962-963 (1960).
- Chen, S., Halkier, B. A. Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus. J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
