की 14 दिन पुरानी Seedlings के Protoplasts के ऊतकों से अलगाव Arabidopsis thaliana</em
Summary
यह वीडियो Arabidopsis की 14 दिन पुरानी seedlings के ऊतकों से बरकरार protoplasts अलग करने के लिए एक प्रक्रिया से पता चलता है. यह देखते हुए कि पृथक protoplasts कम से कम 96h के लिए बरकरार रह रहे हैं और एक महीने की उम्र में परिपक्व पौधों के बजाय seedlings से अलग है, इस प्रक्रिया बरकरार protoplasts की आवश्यकता assays expedites.
Abstract
Protoplasts संयंत्र कोशिकाओं पड़ा है कि अपने सेल दीवारों enzymatically हटा रहे हैं. विभिन्न संयंत्र के ऊतकों से protoplasts के अलगाव पहले अधिक से अधिक 40 साल पहले की सूचना मिली थी<sup> 1</sup> और बाद सेलुलर प्रक्रियाओं के एक प्रोटीन की subcellular स्थानीयकरण बरकरार organelles के अलगाव और डबल असहाय शाही सेना हस्तक्षेप (आरएनएआई) के द्वारा लक्षित जीन निष्क्रियता के रूप में, विविधता का अध्ययन अनुकूलित किया गया है<sup2-5></sup>. मूलतत्त्व अलगाव प्रोटोकॉल के अधिकांश परिपक्व Arabidopsis की पत्ती ऊतकों (जैसे 35 दिन पुराने पौधों) का उपयोग करें<sup2-4></sup>. हम 14 दिन पुरानी Arabidopsis seedlings रोजगार से मौजूदा प्रोटोकॉल को संशोधित. इस प्रक्रिया में 14 दिन पुरानी seedlings के एक ग्राम 10 5 मिले<sup6></sup-10><sup> 7</sup> Protoplasts है कि कम से कम 96 घंटे बरकरार रहते हैं. seedlings से protoplasts की उपज परिपक्व Arabidopsis के पत्तों से तैयारी के साथ तुलनीय है, लेकिन बजाय 35-36 दिनों के, protoplasts के अलगाव 15 दिनों में पूरा हो गया है. यह समय और विकास के चैम्बर अंतरिक्ष कि protoplasts जब परिपक्व पौधों का उपयोग किया जाता है अलग करने के लिए आवश्यक हैं कम की अनुमति देता है, और बहाव के अध्ययन है कि बरकरार protoplasts की आवश्यकता expedites.
Protocol
Discussion
बरकरार मूलतत्त्व की उच्च उपज सुनिश्चित करने के लिए यह बहुत महत्वपूर्ण है स्वस्थ पौधों के साथ शुरू. Protoplasts अलग करने के लिए फिल्टर बाँझ समाधान का उपयोग करें. याद रखें कि protoplasts नाजुक रहे हैं. इसलिए, जब आप protoplasts स?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के कार्नेल विश्वविद्यालय कृषि प्रयोग स्टेशन (CUAES) NYC 125,433 हैच अनुदान और कॉर्नेल प्रारंभ अप OKV के लिए सम्मानित किया अनुदान द्वारा समर्थित किया गया
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Murashige and Skoog Basal Salt Mixture (MS) | Sigma | M5524 | ||
| Agar | Sigma | A1296 | ||
| Petri Dishes (100x15mm) | Kreckeler Scientific | 82-4001 | ||
| Cellulase (Onozuka R‐10) | RPI Corp | C32200 | ||
| Macerozyme (R10) | RPI Corp | M22010 | ||
| Cheesecloth wipes | Fisher Scientific | 06-665-29 | ||
| Lab Rotator | Fisher Scientific | 1167152Q | ||
| Allegra X‐15R Centrifuge | VWR | 392932 | ||
| Axioskop2 Plus Microscope | Zeiss |
References
- Cocking, E. C. A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles. Nature. 187, 962-963 (1960).
- Chen, S., Halkier, B. A. Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus. J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).
- Robert, S., Zouhar, J., Carter, C., Raikhel, N. Isolation of intact vacuoles from Arabidopsis rosette leaf-derived protoplasts. Nat. Protocols. 2, 259-262 (2007).
- Yoo, S. D., Cho, Y. H., Sheen, J. Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis. Nat Protoc. 2, 1565-1572 (2007).
- Zhai, Z., Sooksa-nguan, T., Vatamaniuk, O. K. Establishing RNAi as a reverse genetic approach for gene functional analysis in protoplasts. Plant Phys. 149, 642-652 (2009).
