כימות כרונולוגי שמרים תוחלת החיים על ידי תולדה של תאים בני
Summary
הזדקנות בשמרים כרונולוגית מתייחס לאובדן של כדאיות התא הקשורים זמן בשלב נייח. כאן אנו מתארים את שיטת תפוקה גבוהה עבור כמותית בקביעת תוחלת החיים בשמרים כרונולוגי.
Abstract
שמרים ניצני<em> Saccharomyces cerevisiae</em> הוכיחה להיות אורגניזם מודל חשוב בתחום של מחקר ההזדקנות<sup> 1</sup>. Replicative ואת תוחלת החיים כרונולוגי שתי פרדיגמות הוקמה בשימוש ללמוד הזדקנות בשמרים. הזדקנות replicative מוגדר כמספר התאים בת תא יחיד אמא שמרים מייצרת לפני הזדקנות, הזדקנות כרונולוגי מוגדר על ידי האורך של התאים זמן יכול לשרוד במצב הלא חלוקת קפאון כמו,<sup> 2</sup>. פיתחנו שיטת תפוקה גבוהה עבור מדידה כמותית של תוחלת החיים כרונולוגי. שיטה זו כרוכה הזדקנות התאים בינוני מוגדר תחת תסיסה בטמפרטורה קבועה. בשלב גיל זה, האוכלוסייה משנה של תאים יוסר התרבות הזדקנות מחוסן לתוך מדיום גידול עשיר. רזולוציה גבוהה עקומת גדילה מתקבל אז לאוכלוסייה קטן זה של תאים בגילאי באמצעות מכונה Bioscreen C-MBR. אלגוריתם מוחל אז כדי לקבוע את חלקם היחסי של תאים קיימא באוכלוסייה משנה כל מבוסס על קינטיקה צמיחה בנקודה בגיל זה. שיטה זו דורשת זמן ומשאבים באופן משמעותי פחות בהשוואה כרונולוגי מבחני אחרות תוחלת החיים תוך שמירה על שחזור ודיוק. אופי תפוקה גבוהה של assay זה אמור לאפשר בקנה מידה גדול מסכי גנטיים כימיים לזהות מכפילי אריכות ימים הרומן לבדיקה נוספת של אורגניזמים מורכבים יותר.
Protocol
Discussion
תפוקה גבוהה כרונולוגי תוחלת החיים assay המתוארת כאן היא שיטה יעילה לכימות פוטנציאל התיישנות מספר גדול של זנים עם דיוק דיוק גבוהה. ההתקדמות העיקרית של שיטה זו על פני שיטות קלאסיות לקביעת הישרדות ידי ספירת המושבה להרכיב יחידות (לדוגמא: לראות 3) הוא השימוש במכשיר שיי…
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי NIH גרנט 1R21AG031965-01A1. ח"כ הוא רפואי אליסון קרן מלומד חדש הזדקנות.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bacto Peptone | Reagent | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | Reagent | BD | 288620 | |
| Difco Agar | Reagent | BD | 214530 | |
| Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S. | Reagent | MidSci | J630-500G | |
| Amino Acids | Reagent | Sigma | ||
| Ammonium Sulfate | Reagent | Spectrum | AM185 | |
| Dextrose | Reagent | Fisher | D16-10 | |
| Bioscreen C MBR machine | Tool | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Bioscreen 100-well Honeycomb plate | Tool | Growth Curves USA | 9502550 |
References
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109 (2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D. The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae. Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).
- Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast. Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).
- Fabrizio, P., et al. Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae. J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).
