Количественная Дрожжи Хронологический продолжительность жизни на вырост возрасте клетки
Summary
Хронологический старения у дрожжей относится к потере жизнеспособности клеток, связанных со временем в стационарной фазе. Здесь мы опишем высокой пропускной метод количественного определения дрожжей хронологическом продолжительность жизни.
Abstract
Почкующихся дрожжей<em> Saccharomyces CEREVISIAE</em> Оказалось важным модель организма в области исследований процесса старения<sup> 1</sup>. Репликативной и хронологической продолжительности жизни две установленные парадигмы используются для изучения старения у дрожжей. Репликативного старения определяется как число дочерних клеток одной клетки дрожжей мать производит до старения, хронологического старения определяется период времени клетки могут выживать в не-деления, покоя-подобного состояния<sup> 2</sup>. Мы разработали высокой пропускной метод количественного измерения хронологическом продолжительность жизни. Этот метод заключается в старении клеток в определенной среде при перемешивании и при постоянной температуре. В каждой возрастной точки, суб-популяции клеток удаляется из старения культуры и инокулировали в богатой питательной среде. С высоким разрешением кривая роста является то, полученные для этой субпопуляции в возрасте клетки, используя Bioscreen C MBR машины. Алгоритм применяется затем, чтобы определить относительную долю жизнеспособных клеток в каждой подгруппе населения на основе кинетики роста в каждой возрастной точки. Этот метод требует значительно меньше времени и ресурсов по сравнению с другими хронологическом анализов продолжительность жизни при сохранении воспроизводимость и точность. Высокой пропускной способностью природа этого анализа должны позволять для крупномасштабного генетического и химического экранов, чтобы идентифицировать новые модификаторы долголетия для дальнейшего тестирования в более сложных организмов.
Protocol
Discussion
Высокой пропускной хронологический срок службы анализа, описанного здесь, является эффективным методом для количественного старения потенциал большого числа штаммов с высокой точностью и точностью. Первичного продвижения этого метода по сравнению с классическими методами для опре?…
Acknowledgements
Эта работа была поддержана NIH Грант 1R21AG031965-01A1. МК Эллисон Медицинский фонд Новый ученый в процессе старения.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bacto Peptone | Reagent | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | Reagent | BD | 288620 | |
| Difco Agar | Reagent | BD | 214530 | |
| Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S. | Reagent | MidSci | J630-500G | |
| Amino Acids | Reagent | Sigma | ||
| Ammonium Sulfate | Reagent | Spectrum | AM185 | |
| Dextrose | Reagent | Fisher | D16-10 | |
| Bioscreen C MBR machine | Tool | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Bioscreen 100-well Honeycomb plate | Tool | Growth Curves USA | 9502550 |
References
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109 (2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D. The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae. Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).
- Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast. Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).
- Fabrizio, P., et al. Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae. J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).
