Maya Kronolojik yaşlanma, sabit faz zaman ile ilişkili hücre canlılığı kaybı anlamına gelmektedir. Burada maya kronolojik ömrü kantitatif olarak belirlenmesi için yüksek verimli bir yöntem açıklanmaktadır.
Abstract
Maya<em> Saccharomyces cerevisiae</em> Yaşlanma araştırma alanında önemli bir model organizma olarak kanıtlanmıştır<sup> 1</sup>. Replikatif ve kronolojik ömürleri maya yaşlanma incelemek için kullanılan iki kurulan paradigmalar. Replikatif yaşlanma tek bir maya anne hücre yaşlanması önce ürettiği kızı hücrelerinin sayısı olarak tanımlanır; kronolojik yaşlanma zaman hücrelerinin uzunluğu ile tanımlanır olmayan bir bölme, sükunet gibi hayatta.<sup> 2</sup>. Biz kronolojik ömrü kantitatif ölçümü için yüksek verimli bir yöntem geliştirdik. Bu yöntem, ajitasyon altında tanımlanan orta ve sabit sıcaklıkta hücrelerin yaşlanma içerir. Her yaş noktada, hücrelerin bir alt nüfusun yaşlanma kültürünün kaldırılır ve zengin besi inoküle. Bioscreen C MBR makine kullanan yaşlı hücreleri bu alt nüfus için yüksek çözünürlüklü bir büyüme eğrisi elde edilir. Canlı hücreler, her yaş noktada büyüme kinetiği dayalı, her bir alt-nüfus oranı belirlemek için bir algoritma uygulanır. Bu yöntem, tekrarlanabilirlik ve hassas korurken diğer kronolojik ömrü testleri karşılaştırıldığında önemli ölçüde daha az zaman ve kaynak gerektirir. Bu testte yüksek verimlilik doğa daha karmaşık organizmalar daha fazla test için yeni uzun ömürlü değiştiriciler tanımlamak için, büyük ölçekli, genetik ve kimyasal ekranlar için izin vermelidir.
Protocol
Bölüm 1: yaşlanma kültürlerin Hazırlık YEPD agar plakları üzerine donmuş stokları (% 1 maya özü,% 2 bacto-pepton,% 2 agar,% 2 glukoz) faiz Streak suşları. 30 ˚ C'de 48 saat veya tek koloniler görünene kadar hücrelerin inkübe edin. 5 ml (% 1 maya özü,% 2 bacto-pepton,% 2 glukoz) test tüplerinde YEPD sıvı ortamın içine tek koloniler ve inokülasyon seçin. Grow 30 geceleme kültürleri ˚ C çalkalayıcı veya rulo davul kullanarak sürekli ajitasyon …
Discussion
Burada açıklanan yüksek verim kronolojik ömrü tahlil, yaşlanma, yüksek doğruluk ve hassasiyet ile suşlarının çok sayıda potansiyel ölçülmesi için etkili bir yöntemdir. Bu yöntemin birincil önceden koloni oluşturan birim (örneğin 3 görmek) sayarak hayatta kalma belirlenmesi için klasik yöntemleri üzerinde, yüksek çözünürlüklü büyüme eğrileri elde etmek için bu Bioscreen C MBR makine olarak bir çalkalayıcı / inkübatör / plaka okuma cihazı kullanımı Her yaş noktası…
Acknowledgements
Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüsü, Hibe 1R21AG031965-01A1 tarafından desteklenen oldu. MK Yaşlanma Ellison Tıp Vakfı Yeni Scholar.