高齢者の細胞の伸長によって酵母年表寿命の定量化
Summary
酵母の老化時系列は定常期での時間に関連付けられている細胞の生存率の損失を指します。ここでは、定量的に酵母系列寿命を決定するためのハイスループット法を説明します。
Abstract
出芽酵母<em>サッカロマイセスセレビシエ</em>老化研究の分野において重要なモデル生物であることが実証されています<sup> 1</sup>。複製と時系列のライフスパンは、酵母の老化研究に使用される確立された2つのパラダイムです。経時的老化は時間の細胞の長さによって定義される非分裂、静止のような状態で生き残ることができる、複製老化は、単一の酵母の母細胞が老化する前に生成する娘細胞の数として定義されています<sup> 2</sup>。我々は、時系列寿命の定量的な測定のためのハイスループット法を開発した。この方法は、攪拌下で、一定の温度で定義された培地で細胞を老化伴います。各年齢時点で、細胞の亜集団は、老化培養液から除去され、豊富な増殖培地に接種。高解像度の成長曲線は、Bioscreen C MBRのマシンを使って高齢者の細胞のこの亜集団について得られる。アルゴリズムは、各年齢ポイントでの成長カイネティクスに基づいて、各サブ母集団における生存細胞の相対的な比率を決定するために適用されます。このメソッドは、再現性と精度を維持しながら、他の時系列の寿命のアッセイに比べて大幅に少ない時間とリソースが必要です。このアッセイのハイスループットな性質は、より複雑な生物でさらにテストするために新たな長寿の修飾子を識別するために大規模な遺伝学的および化学的スクリーンを許可する必要があります。
Protocol
Discussion
ここで説明する高スループットの時系列の寿命測定法は高精度と精度を有する株の多数の老化の可能性を定量化するための効果的な方法です。コロニー形成単位をカウントすることで生存を決定するための古典的な手法に比べてこの方法の主な進歩は、（例えば3を参照）、高解像度の成長曲線でを得るためにそのようなBioscreen C MBRのマシンのようなシェーカー/インキュベーター/プ?…
Acknowledgements
この作品は、NIHのグラント1R21AG031965 – 01A1によってサポートされていました。 MKは、高齢化のエリソン医学財団新奨学生です。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bacto Peptone | Reagent | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | Reagent | BD | 288620 | |
| Difco Agar | Reagent | BD | 214530 | |
| Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S. | Reagent | MidSci | J630-500G | |
| Amino Acids | Reagent | Sigma | ||
| Ammonium Sulfate | Reagent | Spectrum | AM185 | |
| Dextrose | Reagent | Fisher | D16-10 | |
| Bioscreen C MBR machine | Tool | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Bioscreen 100-well Honeycomb plate | Tool | Growth Curves USA | 9502550 |
References
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109 (2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D. The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae. Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).
- Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast. Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).
- Fabrizio, P., et al. Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae. J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).
