يعيش تصوير ذبابة الفاكهة السوداء البطن هجرات كرية دموية الجنينية
Summary
hemocytes ذبابة الفاكهة تفريق أكثر من مجمل الجنين النامية. هذا البروتوكول يوضح كيفية تحميل الصور وهذه الهجرات استخدام الاجنة مع hemocytes fluorescently المسمى.
Abstract
العديد من الخلايا باستخدام عنوان دراسات الهجرة<em> في المختبر</em> طرق ، في حين أن بيئة ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية هي الكائن الحي نفسه. هنا نقدم بروتوكول لمن تصاعد<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em> الأجنة الحية والتصوير اللاحقة hemocytes fluorescently المسمى ، والضامة الجنينية من هذا الحي. باستخدام نظام Gal4 – UAS<sup> 1</sup> نحن حملة للتعبير عن مجموعة متنوعة من العلامات ، المرمزة وراثيا في الموسومة fluorescently hemocytes لمتابعة نموهم في جميع أنحاء تفريق الجنين. مجموعة التالية من الأجنة في مرحلة المرجوة من التنمية ، ويتم إزالة المشيماء والخارجي هي التي شنت ثم الأجنة في النفط الهالوكربون بين مسعور ، غشاء الغاز نفاذية وساترة زجاجية للتصوير حي. بالإضافة إلى معلمات الإجمالي المهاجرة مثل السرعة واتجاهها ، وارتفاع القرار التصوير مقرونا استخدام صحفيين الفلورسنت من طراز F – أكتين ميكروتثبول ويمكن أن توفر معلومات أكثر تفصيلا بشأن هيكل الخلية ديناميات هذه المكونات.
Protocol
Discussion
وأهم عناصر هذا الإجراء يتم اختيار الأجنة السليمة مع hemocytes المسمى بوضوح ، ويشن منها بعناية من دون تعرضها للتلف. ولا يمكن تصوير الأجنة مرة واحدة في مجال النفط والهالوكربون أنها مقاومة للجفاف وشنت مرة واحدة لعدة ساعات. في أيدينا يمكننا hemocytes صورة لمدة ثلاث ساعات ، مع الج?…
Acknowledgements
وقد تم تطوير هذا البروتوكول من خلال عملنا داخل وبالتعاون مع مختبرات بول مارتن وخاسينتو انطونيو. نشكر مركز ألبوم بلومينغتون لخدمة الممتازة والمجتمع ذبابة الفاكهة لمواصلة تبادل خطوط الطيران. وتمول حاليا من قبل BS منحة المشروع BBSRC. وتمول من قبل WW زمالة يلكوم ترست التطوير الوظيفي.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell strainer | BD Falcon | 352350 | 70μm pores | |
| Halcarbon oil 700 | Sigma | H8898 | ||
| Lumox/Petriperm dish | Sarstedt | 96077305 |
References
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Bruckner, K. The PDGF/VEGF receptor controls blood cell survival in Drosophila. Dev Cell. 7, 73-84 (2004).
- Dutta, D., Bloor, J. W., Ruiz-Gomez, M., VijayRaghavan, K., Kiehart, D. P. Real-time imaging of morphogenetic movements in Drosophila using Gal4-UAS-driven expression of GFP fused to the actin-binding domain of moesin. Genesis. 34, 146-151 (2002).
- Stramer, B. Live imaging of wound inflammation in Drosophila embryos reveals key roles for small GTPases during in vivo cell migration. J Cell Biol. 168, 567-573 (2005).
- Wood, W., Jacinto, A. Drosophila melanogaster embryonic haemocytes: masters of multitasking. Nat Rev Mol Cell Biol. 8, 542-551 (2007).
- Halfon, M. S. New fluorescent protein reporters for use with the Drosophila Gal4 expression system and for vital detection of balancer chromosomes. Genesis. 34, 135-138 (2002).
- Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. . Drosophila protocols. , (2000).
- Tepass, U., Fessler, L. I., Aziz, A., Hartenstein, V. Embryonic origin of hemocytes and their relationship to cell death in Drosophila. Development. 120, 1829-1837 (1994).
- Millard, T. H., Martin, P. Dynamic analysis of filopodial interactions during the zippering phase of Drosophila dorsal closure. Development. 135, 621-626 (2008).
- Doerflinger, H., Benton, R., Shulman, J. M., St Johnston, D. The role of PAR-1 in regulating the polarised microtubule cytoskeleton in the Drosophila follicular epithelium. Development. 130, 3965-3975 (2003).
- Olofsson, B., Page, D. T. Condensation of the central nervous system in embryonic Drosophila is inhibited by blocking hemocyte migration or neural activity. Dev Biol. 279, 233-243 (2005).
- Paladi, M., Tepass, U. Function of Rho GTPases in embryonic blood cell migration in Drosophila. J Cell Sci. 117, 6313-6326 (2004).
- Vlisidou, I. Drosophila embryos as model systems for monitoring bacterial infection in real time. PLoS Pathog. 5, e1000518-e1000518 (2009).
- Jacinto, A. Dynamic actin-based epithelial adhesion and cell matching during Drosophila dorsal closure. Curr Biol. 10, 1420-1426 (2000).
- Wood, W., Jacinto, A. Imaging cell movement during dorsal closure in Drosophila embryos. Methods Mol Biol. 294, 203-210 (2005).
- Kunwar, P. S. Tre1 GPCR initiates germ cell transepithelial migration by regulating Drosophila melanogaster E-cadherin. J Cell Biol. 183, 157-168 (2008).
