라이브 영상 Drosophila melanogaster 배아 Hemocyte 마이 그 레이션
Summary
Drosophila의 hemocytes은 개발 배아의 전체를 통해 분산. 이 프로토콜은 찬란 표시된 hemocytes와 배아를 사용하여 이러한 마이 그 레이션을 마운트 및 이미지하는 방법을 보여줍니다.
Abstract
사용하는 많은 연구 주소 셀 마이 그 레이션<em> 체외에서</em> 방법은 생리학 관련 환경 반면 유기체 자체이다. 여기서 우리는 장착의를위한 프로토콜을 제시<em> Drosophila melanogaster</em> 배아 및 찬란 분류 hemocytes의 후속 라이브 영상이 유기체의 배아 macrophages. Gal4 – UAS 시스템을 사용<sup> 1</sup> 우리는 배아를 통해 자신의 발달 분산에 따라 hemocytes에서 유전자 인코딩, 찬란 태그 마커의 다양한 표현을 운전. 개발의 원하는 단계에서 배아의 다음 컬렉션, 바깥쪽 chorion이 제거되고 배아는 다음 소수성, 가스 투과 막과 라이브 영상을위한 유리 coverslip 사이 할로 카본 기름에 마운트됩니다. 같은 속도와 방향, F – 굴지와 microtubules이 cytoskeletal 구성 요소의 역학에 관한 자세한 정보를 제공할 수의 형광 기자의 사용과 함께 높은 해상도의 영상으로 총 철새 매개 변수 이외에.
Protocol
Discussion
이 절차의 가장 중요한 요소는 명확하게 표시된 hemocytes과 건강한 태아의 선택이며, 그들을 손상하지 않고 신중하게 그들을 마운트합니다. 배아는 할로 카본 오일에 일단 그들이 탈수에 강한 있으며, 한번 장착은 몇 시간 동안 몇 군데하실 수 있습니다. 우리의 손에 우리는 40X 목적으로 매 삼분의 자이스 혈구 LSM510 공촛점 현미경에 이미지의 Z – 스택을 복용 배아 또는 사진 손상 분명 무시할 수 탈?…
Acknowledgements
이 프로토콜은 폴 마틴과 안토니오 하신토의 연구소와 시간 및 공동 작업을 통해 우리의 개발되었습니다. 우리는 플라이 라인을 공유하는 지속에 대한 훌륭한 서비스와 Drosophila 커뮤니티에 대한 블루밍턴 주식 센터 주셔서 감사합니다. BS는 현재 BBSRC 프로젝트 부여하여 자금이다. WW는 웰컴 트러스트 경력 개발 원정대에 의해 후원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell strainer | BD Falcon | 352350 | 70μm pores | |
| Halcarbon oil 700 | Sigma | H8898 | ||
| Lumox/Petriperm dish | Sarstedt | 96077305 |
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