Uygulamalarda Canlı Görüntüleme Drosophila melanogaster Embriyonik Hemocyte Göçler
Summary
Drosophila hemocytes gelişmekte olan embriyonun bütünlüğü içinde dağılırlar . Bu protokol, floresan etiketli hemocytes embriyoları kullanılarak bu göçler montaj ve görüntü nasıl gösteriyor.
Abstract
Birçok çalışma, adres hücre göçü<em> In vitro</em> Yöntemleri, fizyolojik ilgili çevre ise organizmanın kendini. Burada montaj için bir protokol<em> Drosophila melanogaster</em> Embriyo ve floresan etiketli hemocytes sonraki canlı görüntüleme, bu organizmanın embriyonik makrofajlar. Gal4 UAS sistemini kullanarak<sup> 1</sup> Embriyo boyunca gelişimsel dağılma takip hemocytes genetik olarak kodlanmış, floresan etiketli işaretleyicileri çeşitli ifadesi sürücü. Embriyo gelişiminin istenilen aşamada aşağıdaki toplama, dış koryon kaldırılır ve embriyoların daha sonra bir hidrofobik, gaz geçirgen bir zar ve canlı görüntüleme için bir cam lamel arasında Halokarbon yağ monte edilmiştir. Hız ve yönlülük, F-aktin ve mikrotübüller bu sitoskeletal bileşenlerin dinamikleri ile ilgili daha detaylı bilgi verebilir floresan gazetecilere kullanımı ile birleştiğinde yüksek çözünürlüklü görüntüleme gibi brüt göçmen parametrelere ek olarak.
Protocol
Discussion
Bu prosedürün en önemli unsurlardan açıkça etiketli hemocytes sağlıklı embriyoların seçimi ve onlara zarar vermeden bunları dikkatli bir şekilde monte etmek için. Birkaç saat süreyle imaged embriyoların Halokarbon yağı sonra dehidratasyon dayanıklı ve bir kez monte edilebilir. Bizim ellerde 40X amacı ile her üç dakikada bir Zeiss LSM510 konfokal mikroskop görüntüleri z yığını alarak, embriyo ya da açık foto-hasar ihmal dehidratasyon üç saat görüntü hemocytes,. Hemocytes son derece d…
Acknowledgements
Bu protokol, Paul Martin ve Antonio Jacinto laboratuvarları ile işbirliği içinde ve çalışma ile geliştirilmiştir. Biz Bloomington Menkul Kıymetler Merkezi sinek satırları paylaşmak için devam etmek için mükemmel servis ve Drosophila topluluk için teşekkür ederiz . BS BBSRC bir proje hibe ile finanse edilmektedir. WW, Wellcome Trust Kariyer Geliştirme Bursu tarafından finanse edilmektedir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell strainer | BD Falcon | 352350 | 70μm pores | |
| Halcarbon oil 700 | Sigma | H8898 | ||
| Lumox/Petriperm dish | Sarstedt | 96077305 |
References
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Bruckner, K. The PDGF/VEGF receptor controls blood cell survival in Drosophila. Dev Cell. 7, 73-84 (2004).
- Dutta, D., Bloor, J. W., Ruiz-Gomez, M., VijayRaghavan, K., Kiehart, D. P. Real-time imaging of morphogenetic movements in Drosophila using Gal4-UAS-driven expression of GFP fused to the actin-binding domain of moesin. Genesis. 34, 146-151 (2002).
- Stramer, B. Live imaging of wound inflammation in Drosophila embryos reveals key roles for small GTPases during in vivo cell migration. J Cell Biol. 168, 567-573 (2005).
- Wood, W., Jacinto, A. Drosophila melanogaster embryonic haemocytes: masters of multitasking. Nat Rev Mol Cell Biol. 8, 542-551 (2007).
- Halfon, M. S. New fluorescent protein reporters for use with the Drosophila Gal4 expression system and for vital detection of balancer chromosomes. Genesis. 34, 135-138 (2002).
- Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. . Drosophila protocols. , (2000).
- Tepass, U., Fessler, L. I., Aziz, A., Hartenstein, V. Embryonic origin of hemocytes and their relationship to cell death in Drosophila. Development. 120, 1829-1837 (1994).
- Millard, T. H., Martin, P. Dynamic analysis of filopodial interactions during the zippering phase of Drosophila dorsal closure. Development. 135, 621-626 (2008).
- Doerflinger, H., Benton, R., Shulman, J. M., St Johnston, D. The role of PAR-1 in regulating the polarised microtubule cytoskeleton in the Drosophila follicular epithelium. Development. 130, 3965-3975 (2003).
- Olofsson, B., Page, D. T. Condensation of the central nervous system in embryonic Drosophila is inhibited by blocking hemocyte migration or neural activity. Dev Biol. 279, 233-243 (2005).
- Paladi, M., Tepass, U. Function of Rho GTPases in embryonic blood cell migration in Drosophila. J Cell Sci. 117, 6313-6326 (2004).
- Vlisidou, I. Drosophila embryos as model systems for monitoring bacterial infection in real time. PLoS Pathog. 5, e1000518-e1000518 (2009).
- Jacinto, A. Dynamic actin-based epithelial adhesion and cell matching during Drosophila dorsal closure. Curr Biol. 10, 1420-1426 (2000).
- Wood, W., Jacinto, A. Imaging cell movement during dorsal closure in Drosophila embryos. Methods Mol Biol. 294, 203-210 (2005).
- Kunwar, P. S. Tre1 GPCR initiates germ cell transepithelial migration by regulating Drosophila melanogaster E-cadherin. J Cell Biol. 183, 157-168 (2008).
