Immagini dal vivo di Drosophila melanogaster Migrazioni Hemocyte embrionali
Summary
Ematociti concentrati Drosophila disperdere sulla totalità dello sviluppo dell'embrione. Questo protocollo dimostra come montare e immagine queste migrazioni uso di embrioni con ematociti concentrati fluorescente.
Abstract
Molti studi sulle cellule migrazione indirizzo utilizzando<em> In vitro</emMetodi>, considerando che l'ambiente fisiologicamente rilevanti è quello dell'organismo stesso. Qui vi presentiamo un protocollo per il montaggio di<em> Drosophila melanogaster</em> Gli embrioni e le successive immagini dal vivo di ematociti concentrati fluorescente, i macrofagi embrionale di questo organismo. Utilizzando il sistema UAS-GAL4<sup> 1</sup> Guidiamo l'espressione di una varietà di geneticamente codificato, marker fluorescente taggato in ematociti concentrati a seguire i loro dispersione di sviluppo in tutto l'embrione. A seguito di raccolta di embrioni allo stadio di sviluppo desiderato, il corion esterno viene rimosso e gli embrioni vengono poi montati in olio alocarburi tra un idrofobo, gas-permeabile membrana e un coprioggetto di vetro per l'imaging dal vivo. Oltre al lordo parametri migratori come la velocità e direzionalità, imaging ad alta risoluzione accoppiato con l'uso di reporter fluorescenti di F-actina e microtubuli in grado di fornire informazioni più dettagliate circa la dinamica di questi componenti del citoscheletro.
Protocol
Discussion
Gli elementi più importanti di questa procedura sono la selezione di embrioni sani con ematociti concentrati etichettati in modo chiaro e montare con cura senza danneggiarli. Una volta che gli embrioni sono l'olio alocarburi sono resistenti alla disidratazione e una volta montata può essere ripreso per diverse ore. Nelle nostre mani possiamo ematociti concentrati immagine per tre ore, con disidratazione trascurabile dell'embrione o del foto-danno evidente, prendendo un z-pila di immagini ogni tre minuti sul no…
Acknowledgements
Questo protocollo è stato sviluppato attraverso il nostro lavoro all'interno e in collaborazione con i laboratori di Paul Martin e Antonio Jacinto. Ringraziamo il Centro archivi Bloomington per il suo servizio eccellente e la comunità Drosophila per continuare a condividere linee di volare. BS è attualmente finanziata da una sovvenzione BBSRC progetto. WW è finanziato da una borsa di studio Career Development Wellcome Trust.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell strainer | BD Falcon | 352350 | 70μm pores | |
| Halcarbon oil 700 | Sigma | H8898 | ||
| Lumox/Petriperm dish | Sarstedt | 96077305 |
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